[发明专利]一种鉴定野豌豆属品种真实性的方法及其专用SSR引物组合

说明书

本发明公开了一种鉴定野豌豆属品种真实性的方法及其专用SSR引物组合。本发明提供的SSR引物组合由5个引物对组成，每个引物对由2条引物序列组成，5个引物对中各个引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:10所示。本发明提供的SSR引物组合可用于对野豌豆属品种在种子或幼苗期进行早期鉴定，保证品种的真实性，切实保护生产者和育种家的权益。本发明提供的方法具有准确、低成本、操作简单、节约人力、物力等优点，具有十分广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定野豌豆属品种真实性的方法及其专用SSR引物组合。

背景技术

野豌豆属(Vicia L.)是豆科(Leguminosae)蝶形花亚科(Papilionatae)野豌豆族(Viciae)植物中的一个重要类群，该属多为一、二年生或多年生草本，具有很高的饲草、绿肥、中药及观赏利用价值，其中箭筈豌豆、山野豌豆的粗蛋白含量均高于20％，饲用价值可媲美苜蓿。但是，野豌豆属内物种间形态相似度较高、易混淆，传统的形态学分类存在较大的争议，分类系统不完善及物种精准鉴定方法的缺乏已经成为限制本属种质资源收集、鉴定及开发利用的主要因素之一。目前野豌豆属通过国家审定的品种有9个，分别是江淮(光叶紫花苕)、凉山(光叶紫花苕)、公农(广布野豌豆)、兰箭2号(救荒野豌豆)、川北(救荒野豌豆)、兰箭3号(救荒野豌豆)、清水河(救荒野豌豆)、延边(山野豌豆)、333/A(狭叶野豌豆)。

近年来，随着牧草种质资源的发展，牧草育种越来越受到学者重视，培育推广新的牧草品种是我国牧草育种发展的重要方向。现阶段而言，牧草种质资源繁多，不同品种混杂、掺假现象比较严重，这直接影响了种质资源的使用和保护。因此，牧草品种的鉴定至关重要，不仅对新品种的保护与审定，也是区分假劣种子，维护培育者自知识产权的重要手段。

传统的品种鉴定主要是依靠荚果、花、叶及卷须等形态学标记作为分类的依据。虽然形态标记研究简单直观且较经济，但野豌豆属中不同种或品种间的形态特征极为相似，在种间交互难以区分，另外形态性状极易受到环境的影响而发生变化，这给种或品种鉴别带来困难。在分子水平上对种质进行鉴定不受环境和生长阶段的影响，结果稳定，可靠性强。因此，寻求从分子水平真正准确识别野豌豆属植物品种具有现实意义。DNA分子标记的出现和快速发展，有望为野豌豆属植物品种的准确鉴定提供了一种新的技术手段。

简单重复序列(simple sequences repeats，SSR)分子标记具有信息含量高、共显性遗传、数量丰富、分析方法简单、结果重复性好、省事省力省钱等优点。目前SSR标记是种质鉴定方面最灵敏、最可靠的一种分子标记，已成为鉴别品种分子身份证的较理想的分子标记技术。然而银染法由于制胶过程受环境影响较大、垂直电泳加样中易于串样、显影后分离片段无法确定分子量大小，从而会造成不同批次样品数据比对中产生误差，降低了检测的效率及精确性。SSR荧光标记毛细管电泳法是基于DNA测序仪为平台的检测方法，具有高效、自动化等技术优势，检测效率远高于银染法，结果更为精确、灵敏。

发明内容

本发明的目的是鉴定待测野豌豆为或候选为9种野豌豆属国审品种中的哪一种。

本发明首先保护鉴定待测野豌豆为或候选为9种野豌豆属国审品种中的哪一种的引物组合，可为引物组合2或引物组合1；所述9种野豌豆属国审品种为江淮、凉山、公农、兰箭2号、川北、兰箭3号、清水河、延边和333/A。