[发明专利]一种血浆外泌体提取试剂、富集方法、提取试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种血浆外泌体提取试剂，其特征在于，所述提取试剂包括非离子多聚物、硫化物、加入或者不加入盐。

2.根据权利要求1所述的一种血浆外泌体提取试剂，其特征在于，所述非离子多聚物选自PEG、多聚赖氨酸、多聚赖氨酸PEG、DSS、PVP、硫酸葡聚糖中的一种或者多种；所述硫化物选自TCEP、DTT、巯基乙醇中的一种或者多种；所述盐为氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、氯化锰、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的一种血浆外泌体提取试剂，其特征在于，所述的PEG分子量为5000-20000道尔顿；所述PVP的分子量为10000-40000道尔顿；所述硫酸葡聚糖分子量为3000-50000道尔顿；所述多聚赖氨酸的分子量为3万-30万道尔顿；所述多聚赖氨酸PEG为polylysine PEG Conjμgate, 分子量为2000-5000道尔顿。

4.根据权利要求2所述的一种血浆外泌体提取试剂，其特征在于，所述非离子多聚物在试剂中的最终质量浓度为10-50%。

5.根据权利要求2所述的一种血浆外泌体提取试剂，其特征在于，所述硫化物在试剂中的最终浓度范围为0.1-10mg/ml。

6.根据权利要求2所述的一种血浆外泌体提取试剂，其特征在于，所述盐在试剂中的最终浓度范围为5mM-500mM。

7.使用如权利要求1-6任一项所述的血浆外泌体提取试剂富集外泌体的方法，包括以下步骤：

1) 按常规方法获得血浆样本，加入生理盐水或者磷酸盐缓冲溶液处理样本；加入体积为样本体积的0.5-2倍，充分混匀；

2) 向步骤1）所得的生物样品中加入蛋白酶K溶液，加入体积为步骤1）最终体积的0.01-0.1倍，充分混匀后30-40℃处理；然后加入血浆外泌体提取试剂，加入体积为上述总体积的0.1-2倍；

3) 将步骤2）所得的溶液混合均匀，放置2-8℃环境下静置1-60分钟；

4) 将步骤3）所得的溶液将样品于低速下离心5000-10000g，离心时间为5-30分钟，所得沉淀为外泌体。

8.一种血浆外泌体提取试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-6任一项所述的血浆外泌体提取试剂。

9.根据权利要求8所述的一种血浆外泌体提取试剂盒，其特征在于，还包含有蛋白酶K。

10.如权利要求1-6任一项所述的血浆外泌体提取试剂在提取小鼠或者大鼠血浆外泌体中的应用。