[发明专利]一种可视化检测儿童流感病毒的CRISPR系统及其方法和应用

说明书

本发明属于核酸检测领域，公开了一种可视化检测儿童流感病毒的CRISPR系统及其方法和应用。这种CRISPR系统将病毒收集系统、恒温核酸扩增系统和检测系统整合在一起，检测系统整合了CRISPR反应元件和侧向层析试纸条，收集的病毒依次通过病毒裂解、核酸扩增、检测步骤，检测结果在侧向层析试纸条上通过条带显色直观地呈现出来，检测时间短，操作方便，实现了对儿童流感病毒的高灵敏度、特异性、多通道可视化检测，同时也便于在现场快速检测。

技术领域

本发明属于核酸检测领域，具体涉及一种可视化检测儿童流感病毒的CRISPR系统及其方法和应用。

背景技术

流行性感冒(简称流感)是人类面临的主要公共健康问题之一，它是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其流行特点为突然爆发，迅速蔓延，波及面广。儿童是流感的高发人群及重症病例的高危人群，这种传染性疾病起病急，临床表现缺乏特异性。新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病，与流感的症状表现有很多相似之处，难以快速精准区分，而相关疾病病原体标志物的快速、准确检测为流感和新型冠状病毒肺炎的早期诊断提供了重要的方法和思路。

核酸标志物(DNA和RNA)是当前体外诊断的主要目标分子之一。传统的核酸检测方法包括微阵列法、PCR法、原位杂交法等，虽然这些方法能实现目标核酸的准确检测，但需要精密昂贵的仪器、专业的操作人员、复杂的操作步骤等，限制了在现场检测中的应用。因此，亟需建立一种可用于现场、简易、快速且高灵敏度的检测技术。

CRISPR是近年来十分热门的高灵敏及特异性检测技术，已有相关技术以CRISPR为基础进行核酸检测，虽然使用CRISPR技术解决了高灵敏度、特异性检测的问题，但是在检测结束后要借助紫外灯、凝胶成像仪或荧光显微镜等来进行可视化判读，仍然没有实现快速、简易检测的目的。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种可视化检测儿童流感病毒的CRISPR系统，将病毒收集系统、恒温重组酶多聚酶扩增(RT-RPA)反应元件、CRISPR反应元件及侧向层析试纸条整合在一起，能够实现对儿童流感病毒核酸的高灵敏度、特异性、快速、简易的现场检测。

本发明还提出一种上述CRISPR系统的检测方法。

本发明还提出上述CRISPR系统的应用。

根据本发明的一个方面，提出了一种可视化检测儿童流感病毒的CRISPR系统，包括：

病毒收集系统，所述病毒收集系统用于收集儿童流感病毒；

核酸扩增系统，所述核酸扩增系统包括依次连接的病毒裂解元件和恒温重组酶多聚酶扩增元件；所述病毒裂解元件与所述病毒收集系统连通，所述病毒裂解元件用于接收所述病毒收集系统收集到的所述儿童流感病毒并完成裂解；所述恒温重组酶多聚酶扩增元件用于接收裂解后的儿童流感病毒并进行核酸扩增；

检测系统，所述检测系统包括依次连接的CRISPR反应元件和侧向层析试纸条；所述CRISPR反应元件与所述恒温重组酶多聚酶扩增元件连接，所述CRISPR反应元件用于识别和切割核酸扩增产物；所述侧向层析试纸条用于对识别和切割后的产物进行可视化检测。

根据本发明的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：

本发明基于CRISPR检测技术、恒温核酸扩增技术和侧向层析技术，开发出一种儿童流感病毒的高灵敏度、特异性和多通道核酸可视化检测系统；同时将该检测系统与病毒收集系统相结合，实现无需专业技术人员操作的一体化检测，满足在社区门诊、乡镇医院推广使用的需求，同时在季节性流感流行时，可在校车、幼儿园等场所实现儿童流感快速检测，最大限度地抑制病毒扩散，减少儿童流感患者。