[发明专利]一种治疗细菌性眼内炎的药物及制备方法

权利要求书

1.一种治疗细菌性眼内炎的药物，其特征在于：药物中包括有抗菌肽，其中抗菌肽在药液中的含量为2-512μg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种治疗细菌性眼内炎的药物，其特征在于：所述的抗菌肽为ik-12、pp-12、rk-12、ip-12和wp-12中的任一种，前述五种抗菌肽的序列分别为：ilrwpwwpwrrk、pwirrlwrkwwp、rwiprlwrpwwk、irlrwrwkwpwp和wpirlrwrwkwp。

3.一种治疗细菌性眼内炎药物的制备方法，其特征在于：其方法包括如下步骤：

第一步、准备所用仪器与试剂：多肽固相合成管；分析型HPLC；氨基酸；树脂；DMF；哌啶；茚三酮；苯酚；HBTU；HoBt；DCM；甲醇；EDT；TIS；水；乙腈；TFA；

第二步、固相多肽合成，合成条件：室温，具体步骤如下：

步骤1、树脂溶涨：将树脂放入反应管中，加DCM，DCM的含量为15mL/g，30min；

步骤2、脱保护：去掉DCM，加20％哌啶DMF溶液，DMF的含量为15mL/g，时间5min，再加20％哌啶DMF溶液，DMF的含量为15mL/g，时间15min；

步骤3、检测：抽掉哌啶溶液，取数粒树脂，用乙醇洗三次，加入茚三酮，苯酚溶液各一滴，105℃-110℃加热5min，变深蓝色为阳性反应；

步骤4、洗涤：加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤六次；

步骤5、缩合：保护氨基酸三倍过量，HOBt三倍过量，均用DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIC三倍过量，反应90min；

步骤6、洗涤：加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤三次；

步骤7、重复步骤2至步骤6操作，依次连接氨基酸；

步骤8、最后一次洗涤，加入DMF，DMF的含量为10mL/g，洗涤三次；加入DCM，DCM的含量为10mL/g，洗涤三次，加入甲醇，甲醇的含量为10mL/g，洗涤三次；

步骤9、裂解：配制裂解液，裂解液按重量百分比为TFA 86％、苯甲硫醚4％、水3％、EDT5％和苯酚2％，进行裂解120min；

步骤10、抽滤洗涤：将裂解液用砂芯漏斗将裂解液和树脂分离，将裂解液搅拌加入裂解液八倍体积的乙醚中，用布氏漏斗进行抽滤分离，抽干后用乙醚将漏斗中多肽固体洗三次，然后常温挥干，干燥后装袋；

步骤11、HPLC纯化：分析型HPLC纯化，C18反相柱，以水和乙腈做流动相，在流动相中加入0.1％的TFA，梯度从10％-90％进行纯化；

第三步、每种抗菌肽的实验步骤如下：

步骤1、IK-12，序列为ilrwpwwpwrrk，分子量：1779.173；

Fmoc-linker Am resin

︱1

Lys 2

︱1

Arg 2

︱1

Arg 2

先将Fmoc氨基酸树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc-Lys或Boc-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作,HBTU+DIEA加Fmoc-Arg或pbf-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc后，将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品；

步骤2、PP-12,序列为pwirrlwrkwwp，分子量：1779.173；

Rink Amide MBHA resin

︱1

Pro 2

︱1

Trp 2

︱1

Trp 2

先将树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc-Pro-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，HBTU+DIEA加Fmoc-Trp或Boc-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc，之后将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品；

步骤3、RK-12,序列为rwiprlwrpwwk，分子量：1779.173；

Rink Amide MBHA resin

︱1

Lys 2

︱1

Trp 2

︱1

Trp 2

先将树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc-Lys或Boc-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作.HBTU+DIEA加Fmoc-Trp或Boc-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc，之后将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品；

步骤4、IP-12,序列为irlrwrwkwpwp，分子量：1779.173；

Rink Amide MBHA resin

︱1

Pro 2

︱1

Trp 2

︱1

Pro 2

先将树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc-Pro-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作.HBTU+DIEA加Fmoc-Trp或Boc-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc，之后将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品；

步骤5、WP-12,序列为wpirlrwrwkwp，分子量：1779.173

Rink Amide MBHA resin

︱1

Pro 2

︱1

Trp 2

︱1

Lys 2

先将树脂进行1的操作，1的操作为20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，2的操作为HBTU+DIEA加Fmoc-Pro-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作，20％Piperidine反应20分钟，用检测试剂检测颜色为蓝色；

进行2的操作，HBTU+DIEA加Fmoc-Trp或Boc-OH反应1小时，用检测试剂检测颜色为无色,再进行1的操作,如此类推直到最后一个氨基酸Ile脱Fmoc，之后将树脂抽干切割得到粗品肽，将粗品肽送HPLC纯化，冻干后得到精品。