[发明专利]一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法

说明书

本发明属于激素检测技术领域，涉及一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法。针对现有技术中雌激素在生物样本和人体内以痕量水平存在，在干血片样本中含量极低，雌激素化合物极性较小，在质谱中ESI和APCI源中离子化效率不高，直接检测灵敏度不高的技术问题，本申请提供一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，包括衍生化试剂、第一萃取剂和第二萃取剂，萃取和衍生化前处理结合超高效液相色谱串联质谱能快速简便准确的检测出干血片中痕量的雌激素。本申请还提供了一种测定干血片中多种雌激素的方法，用第一萃取剂将雌激素从干血片中萃取，再衍生化，用第二萃取剂将衍生后的雌激素再次萃取，增大了通量，提高了分析效率。

技术领域

本发明属于激素检测技术领域，具体地，涉及一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法。

背景技术

雌激素是女性体内重要的性激素，具有重要而广泛的生理作用，研究表明雌激素不仅有维持女性生殖功能和第二性征的生理作用，而且对人体的新陈代谢的调节、神经系统的发育、骨骼的生长等有一定程度的影响，雌激素其主要包括雌酮（E1）、雌二醇（E2）及雌三醇（E3）3种。雌酮在人体中的水平是评估性早熟，老人骨骼风险评估的重要指标，雌二醇是妇女体内生物活性最强的雌激素，雌三醇是雌二醇和雌酮的代谢产物，前体来源于胎儿肾上腺和肝，由胎盘合成分泌，是妊娠期的主要雌激素，雌三醇水平的高低与胎盘和胎儿有效的代谢功能有密切关系，直接影响胎儿的生长发育。测定孕妇体中雌激素，是判断胎盘功能、预测胎儿状态及监护胎儿安全较可信的方法。是高危妊娠监测，过期妊娠胎盘功能评估，预测早产的可靠指标。雌激素水平异常还是骨质疏松症、神经性厌食症、心血管疾病、乳腺癌，唐氏综合征，女性性发育不全，多囊卵巢综合征，男性乳房发育等的主要原因之一。因此，对人体中的雌激素定性定量分析，能够更早发现疾病的异常变化，有助于研究疾病产生机制、临床诊断以及开发医疗药物。

临床生物样品中内源性激素的测定方法主要采用放射免疫分析法和化学发光免疫法等免疫分析法，但由于免疫分析法中同一抗体可能与多种抗原发生反应，容易受相关内源性类固醇、脂质和基质效应的干扰，其对于雌激素测定的特异性和可靠性仍然存在疑问导致其灵敏度与准确度都不足以及放射性危害等缺陷，再加之各测定方法学间的可比性差等原因。超高效液相色谱串联质谱法分析法的特异性高，干扰低的特点可以来提高检测结果的灵敏度，可同时检测三种激素的浓度，通量大，检测方法的准确度和精密度更高。如中国专利申请公布号CN109470791A，发明名称为“一种高效液相色谱-串联质谱检测血清雌激素的方法及试剂盒”，公开的试剂盒包括洗脱液、稀释液、萃取剂、质控品和色谱柱，萃取剂为乙酸乙酯/正己烷；检测血清中雌激素的方法，包括如下步骤：样本预处理；色谱分离；质谱检测；利用系列浓度的雌激素标准品制备标准曲线的步骤，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算血清样本中雌激素的含量。但是，干血片样本中雌激素含量极低，化合物极性都较小，在质谱中ESI和APCI源中离子化效率不高，直接检测的灵敏度不高，因此需要在前处理过程中进行衍生化来提高分析的响应。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有技术中雌激素在生物样本和人体内以痕量水平存在，在干血片样本中含量极低，雌激素化合物极性较小，在质谱中ESI和APCI源中离子化效率不高，直接检测灵敏度不高的技术问题，本申请提供一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，萃取和衍生化前处理结合超高效液相色谱串联质谱能快速简便准确的检测出干血片中痕量的雌激素。本申请还提供了一种测定干血片中多种雌激素的方法，用第一萃取剂将雌激素从干血片中萃取，再衍生化，用第二萃取剂将衍生后的雌激素再次萃取，增大了通量，提高了分析效率。

2、技术方案

为达到上述目的，提供的技术方案为：

本发明的一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒，所述试剂盒包括以下组分：校准品、质控品、内标准品、衍生化试剂、缓冲液、第一萃取剂、第二萃取剂。

进一步的，所述衍生化试剂为N-三甲基硅烷基咪唑、五氟苯甲酰氯、五氟苄基羟胺或丹磺酰氯。