[发明专利]一种检测副溶血性弧菌的CDA引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的检测副溶血性弧菌的CDA引物组，其特征在于：所述CDA引物组为以下两对引物，

引物对VP-F2/VP-R2，其中，VP-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，VP-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对VP-MF/VP-MR，其中，VP-MF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，VP-MR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.一种检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的CDA引物组。

3.如权利要求2所述的一种检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于：所述CDA引物组中，引物VP-F2与VP-R2的浓度均为0.2～0.4μM，引物VP-MF与VP-MR的浓度均为1～2μM。

4.如权利要求2所述的一种检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括Bst聚合酶、CDA反应缓冲液、超纯水以及显色剂。

5.如权利要求4所述的一种检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于：所述显色剂选自SYBR green I、Eva green、羟基萘酚蓝、铬黑T中的一种。

6.如权利要求4所述的一种检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于：所述CDA反应缓冲液包括：Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄和Triton X-100。

7.如权利要求2所述的一种检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒反应体系的组成为：

2-50mM Tris-HCl pH8.8

2-20mM KCl

2-20mM(NH₄)₂SO₄

2～20mM MgSO₄

0.1～0.5％TritonX-100

0.2～1M甜菜碱

1～1.6mM dNTP

5～10U Bst DNA聚合酶

100～150μmol/L显色剂

0.2～0.4μM引物VP-F2

0.2～0.4μM引物VP-R2

1～2μM引物VP-MF

1～2μM引物VP-MR；

反应溶剂为超纯水。

8.权利要求7所述的试剂盒非疾病诊断目的的检测副溶血性弧菌的方法，包括以下步骤：

步骤1：将待检测核酸样本和试剂盒的反应体系混合，制备扩增反应液；

步骤2：上述制备得到的扩增反应液，于60～65℃反应20～80min，根据显色结果判断样品中是否含有副溶血性弧菌。

9.权利要求1所述的CDA引物组在非疾病诊断目的的副溶血性弧菌检测中的应用。

10.权利要求2-7任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的副溶血性弧菌检测中的应用。