[发明专利]基于流式细胞仪的微量细胞磷酸化蛋白表达的检测方法

权利要求书

1.基于流式细胞检测仪的微量细胞磷酸化蛋白表达的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将待检测细胞进行固定处理；

（2）将步骤（1）中固定后的待检测细胞与辅助沉降细胞进行混合，离心得到混合细胞；

（3）将步骤（2）得到的混合细胞进行通透处理；

（4）将步骤（3）通透处理后的混合细胞使用抗体进行标记并进行孵育；

（5）使用流式细胞检测仪去除所述辅助沉降细胞后，检测所述待检测细胞的磷酸化蛋白表达水平；

所述辅助沉降细胞与所述待检测细胞大小不同；所述辅助沉降细胞的阴性或阳性与所述待检测细胞的阴性或阳性相反；所述阴性是指不表达所需检测指标，所述阳性是指表达所需检测指标。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述辅助沉降细胞选自能携带标记的细胞。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待检测细胞与所述辅助沉降细胞的比例为1：1-1：1000000。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待检测细胞为小鼠骨髓细胞，所述辅助沉降细胞选择293T细胞；或所述待检测细胞为小鼠骨髓造血祖细胞，所述辅助沉降细胞选择293T细胞；或所述待检测细胞为GFP阴性K562细胞，所述辅助沉降细胞选择GFP阳性细胞；或所述待检测细胞为K562细胞，所述辅助沉降细胞选择GFP阴性细胞；或所述待检测细胞为GFP阳性的K562细胞，所述辅助沉降细胞选择A2780细胞。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述待检测细胞使用标记抗体标记后再进行固定；步骤（5）中，所述流式细胞检测仪去除所述辅助沉降细胞后，使用靶细胞特异性识别步骤（1）中的标记抗体，然后再检测所述待检测细胞的磷酸化蛋白表达水平。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（5）中，在检测所述待检测细胞的磷酸化蛋白表达水平之前，排除不完整细胞的干扰。

7.根据权利要求1述的检测方法，其特征在于，所述磷酸化包括ERK磷酸化、p38磷酸化或rps6磷酸化。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法适用于干细胞磷酸化总蛋白表达检测；或循环肿瘤细胞磷酸化蛋白表达检测。