[发明专利]一种重组杆状病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明实施例涉及一种表达牛病毒性腹泻病毒E2基因的重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于生物工程领域，重组杆状病毒包含一个或多个拷贝的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的编码基因，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过E2蛋白基因序列进行碱基修饰和优化，使蛋白的免疫原性更好。通过与专利的605佐剂混合配制疫苗，更增强了疫苗的免疫效果。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品领域，具体为，一种表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的重组杆状病毒、重组杆状病毒的制备方法、一种重组杆状病毒在制备牛病毒性腹泻病毒的抗原、抗体或亚单位疫苗中的应用、一种牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗、一种牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗的制备方法。

背景技术

牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)是引起的牛的粘膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为特征的传染性疾病的病原，是黄病毒科、瘟病毒毒属的代表种。牛病毒性腹泻病毒可感染各种年龄的牛，以幼龄牛易感性最高，主要侵害6～18月龄的幼牛。传染来源主要是病畜，以直接接触或间接接触方式进行传播。患牛表现为发病急，体温突然升高至40～42℃，食欲废绝，消化道粘膜损伤严重，最初常表现为水样腹泻，后期便中带血和粘膜，病牛的死亡率可高达90％。怀孕母牛感染后，可造成流产、早产或死胎。如足月生产，犊牛可表现为先天性缺陷，小脑发育不全，共济失调，或不能站立、发育不良、生长缓慢、饲养困难。因此养殖场必须防控牛病毒性腹泻病毒。

BVDV感染情况复杂，持续性感染个体症状隐秘，即使BVDV感染90％情况下也很难引起注意，因此防控BVDV十分必要。另外，目前由牛病毒性腹泻病毒2型引起的犊牛腹泻，感染更为严重。目前为止，牛病毒性腹泻病毒疫苗的使用和试剂盒辅助检测是预防本病既简单又有效的方法。但由于疫苗毒株基因型差异、母源抗体、多次免疫和自然感染等因素的影响使得BVDV感染后血清型变得复杂。目前，全球商品化的BVD疫苗有许多种，但大多数疫苗都是针对BVDV1型毒株的，专门针对预防BVDV2型流行毒株的疫苗尚未见报道。减少牛病毒性腹泻病毒2型感染对养牛业造成的损失，是本领域亟需解决的技术问题。

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

发明目的

本发明的目的在于提供在于提供一种重组杆状病毒、重组杆状病毒的制备方法、一种重组杆状病毒在制备牛病毒性腹泻病毒的抗原、抗体或亚单位疫苗中的应用、一种牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗、一种牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗的制备方法。

本发明将2型BVDV病毒结构蛋白E2基因与Erns基因经过碱基修饰后克隆至pFastBacDual载体，构建pFBD-BVDV2-E2重组杆状病毒载体，在大肠杆菌中转座，获得重组杆状病毒载体Bacmid-BVDV2-E2，再转染昆虫细胞sf9进行表达，收获即得；能够稳定表达具有良好免疫原性的BVDV2-E2蛋白。

本发明的重组杆状病毒，属于杆状病毒科，核型多角体病毒属，拉丁文学名为Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，该重组杆状病毒命名为苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(简称杆状病毒)Baculo-BVDV2-E2。

解决方案

为实现本发明目的，提供如下技术方案：

一方面，本发明提供一种重组杆状病毒，其包含一个或多个拷贝的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的编码基因，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1序列为优化后的氨基酸序列：