[发明专利]一种重组杆状病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组杆状病毒，其特征在于，其包含一个或多个拷贝的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的编码基因，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的重组杆状病毒，其特征在于，如SEQ ID NO.1所示的E2蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO.3所示；

可选地，所述牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的编码基因的5’端连接有BVDV2-Erns基因的编码序列，可选地，所述BVDV2-Erns基因的编码序列如SEQ ID NO.5所示；

可选地，所述重组杆状病毒含有如SEQ ID NO.7所示的序列；

可选地，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，可选地，如SEQ ID NO.2所示的E2蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1或2所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的编码基因在P10启动子的控制下转录；

可选地，用于构建所述重组杆状病毒的基础转移载体为pFastBacDual。

4.一种重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)密码子优化：对编码牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的基因进行密码子优化，优化后的E2蛋白的编码基因序列如SEQ ID NO.3所示；可选地，在如SEQ ID NO.3所示的序列的5’端连接BVDV2-Erns基因的编码序列，获得如SEQ ID NO.7所示的BVDV2-Erns-E2基因序列；

(2)载体构建：将如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.7所示的序列与基础转移载体连接，构建含有一个或多个拷贝的E2蛋白编码基因的重组转移载体；可选地，基础转移载体为pFastBacDual；

(3)将步骤(2)重组转移载体转入大肠杆菌DH10Bac，获得携带一个或多个拷贝的E2蛋白编码基因的重组杆粒；

(4)将步骤(3)的重组质粒导入昆虫细胞，获得重组杆状病毒。

5.权利要求1至3任一所述的重组杆状病毒或采用权利要求4所述的制备方法制备得到的重组杆状病毒在制备牛病毒性腹泻病毒的抗原、抗体或亚单位疫苗中的应用。

6.一种牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗，其特征在于，其包含牛病毒性腹泻病毒E2蛋白，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求6所述的牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗，其特征在于，所述E2蛋白为采用权利要求1至3任一所述的重组杆状病毒或采用权利要求4所述的制备方法制备的重组杆状病毒表达得到。

8.一种牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，采用重组杆状病毒表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白，所述重组杆状病毒为权利要求1至3任一所述的重组杆状病毒或采用权利要求4所述的制备方法制备得到的重组杆状病毒；

可选地，包括如下步骤：

1)将所述重组杆状病毒导入昆虫细胞，培养，表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白；

2)分离和纯化E2蛋白；

3)将经纯化的E2蛋白与佐剂混合，制备亚单位疫苗；可选地，所述佐剂包括605佐剂，可选地，纯化的E2蛋白与佐剂605的重量比为1∶(0.8～1.5)。

9.一种疫苗组合物，其特征在于，含有权利要求1至3任一所述的重组杆状病毒、或采用权利要求4所述的制备方法制备得到的重组杆状病毒、或权利要求6或7所述的牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗、或权利要求8所述的制备方法制备的牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗。

10.一种检测2型牛病毒性腹泻病毒病的诊断试剂盒，其特征在于，含有权利要求1至3任一所述的重组杆状病毒、或采用权利要求4所述的制备方法制备得到的重组杆状病毒、或权利要求6或7所述的牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗、或权利要求8所述的制备方法制备的牛病毒性腹泻病毒亚单位疫苗。