[发明专利]维生素D的痕量检测方法及试剂盒

说明书

本发明涉及种维生素D的痕量检测方法及试剂盒。该方法包括；配制25(OH)D₂、25(OH)D₃、3‑epi‑25(OH)D₃、25(OH)D₂‑d₆、25(OH)D₃‑d₆标准溶液；取血清样品，加入含有内标的沉淀剂混合液、混匀，预处理后，加入复溶液复溶，进行HPLC－MS/MS分析，以内标法测定血清样品中25(OH)D₂、25(OH)D₃以及3‑epi‑25(OH)D₃的含量。通过执行该方法，降低对仪器的高性能指标要求，提高检测普及率；此外，本方法检测的线性范围较宽，分析时间缩短了66％，有效提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种维生素D的痕量检测方法及试剂盒。

背景技术

维生素D有调节钙磷代谢的经典作用和影响细胞增殖分化等非经典作用，是维持人体健康必不可少的一种类固醇激素。维生素D的缺乏时可导致儿童佝偻病和成年人软骨症。近年来，深入的研究表明维生素D缺乏会增加罹患肿瘤、心血管疾病、自发免疫性疾病等慢性疾病的风险，维生素D过量会引起血管器官钙化、高血压、肾衰竭等问题。25-羟基维生素D(分为25-羟基维生素D₂，25(OH)D₂和25-羟基维生素D₃，25(OH)D₃)水平被定义为维生素D营养状态的功能指标，已经成为国际上公认的衡量维生素D的最佳指标。

在临床生物化学诊断实验室中，维生素D最常用的分析技术仍然是免疫分析，但其无法进行区分检测会影响到25(OH)D₃的准确定量。

本申请旨在建立一种系统性解决维生素D的痕量检测方法及实施系统。

发明内容

为了实现根据本发明的上述目的和其他优点，本发明的第一目的是提供一种维生素D的痕量检测方法，包括如下步骤：

配制25(OH)D₂、25(OH)D₃、3-epi-25(OH)D₃、25(OH)D₂-d₆、25(OH)D₃-d₆标准溶液；

取血清样品，加入含有内标的沉淀剂混合液、混匀，预处理后，加入复溶液复溶，进行HPLC－MS/MS分析，以内标法测定血清样品中25(OH)D₂、25(OH)D₃以及3-epi-25(OH)D₃的含量。

优选地，所述预处理步骤包括：

加入萃取液，混匀、离心，取上层溶液于室温下氮气吹干。

优选地，所述25(OH)D₂、25(OH)D₃、3-epi-25(OH)D₃稀释后的浓度为1ng/mL-200ng/mL，所述25(OH)D₂-d₆、25(OH)D₃-d₆稀释后的浓度分别为120ng/mL、300ng/mL。

优选地，色谱柱为Kinetex F5色谱柱。

优选地，流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：0.1％甲酸甲醇溶液。

优选地，色谱柱的柱温:40～45℃；流速:0.3～0.5mL/min。

优选地，梯度洗脱:0-0.5min，50％B；0.5-6.0min，95％B；6.0-7.0min，95％B；7.0-7.1min，50％B；7.1-8.5min，50％B。