[发明专利]去除血清中外泌体的方法及过滤装置

说明书

本申请涉及去除血清中外泌体的方法及过滤装置。过滤装置包括装置主体、固定相和过滤件，固定相填充于装置主体内部，固定相为外泌体吸附物质，外泌体吸附物质为负载有核酸适配体的基质；核酸适配体为能够特异性识别外泌体表面的跨膜蛋白CD9/CD63/CD81的核酸适配体；基质为全多孔硅胶微球或高分子多孔微球；过滤件设置于装置主体的一端。并提供了使用此过滤装置去除血清中外泌体的方法，将血清通过超速离心，再通过上述过滤装置，最后进行无菌处理。处理后的血清通过ZETAVIEW、SEM透射电镜、细胞培养和血清外泌体ELISA试剂盒等检测，均未检测到外泌体，取得了比较优异的去除血清中外泌体的效果。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，尤其是涉及去除血清中外泌体的方法及过滤装置。

背景技术

对血清进行研究是常用的疾病诊断方法。在每毫升血清中，往往会含有约10¹⁰～10¹¹个外泌体，外泌体为携带有蛋白质、脂质和遗传物质等组分的囊泡结构，直径大小在30～200nm。血清中的外泌体可以调控肿瘤生长、免疫应答和血管疾病等多种病理生理过程，能够对细胞的表型产生影响，进而改变细胞自身外泌体的蛋白表达质谱，从而对血清检测的结果产生不同程度的干扰。

目前，去除血清中外泌体主要采用超速离心法和免疫磁珠法等方法，超速离心法需要进行连续多次操作，并且需要静置较长时间，但得到的血清中仍然残留部分外泌体。而免疫磁珠法的成本比较高，一次操作只能处理少量的血清，并且只能去除血清中的部分外泌体。使用目前存在的方法处理血清，经过处理后的血清中仍存在较多外泌体，依然会对下游细胞外泌体的研究产生一定的影响，因此存在改进空间。

发明内容

为了降低处理后的血清中外泌体的含量，进而降低血清中的外泌体对研究血清时的影响，本申请提供去除血清中外泌体的方法及过滤装置。

第一方面，本申请提供了外泌体吸附物质，所述外泌体吸附物质为负载有核酸适配体的基质；所述核酸适配体为能够特异性识别外泌体表面的跨膜蛋白CD9/CD63/CD81的核酸适配体；所述基质为全多孔硅胶微球或高分子多孔微球。

外泌体的表面上有跨膜蛋白CD9/CD63/CD81，选择能够特异性识别外泌体表面的跨膜蛋白CD9/CD63/CD81的核酸适配体，并将该核酸适配体负载于全多孔硅胶微球或高分子多孔微球上，以得到合适的外泌体吸附物质。全多孔硅胶微球的多孔结构使其具有吸附特性，可以负载核酸适配体，并且较大的比表面积使其可以负载较多的核酸适配体，从而能够更高效的分离血清和外泌体。而高分子多孔微球可通过人为控制其孔径和表面性质，可以将核酸适配体负载在高分子表面微球上形成外泌体吸附物质。并且高分子表面微球的比表面积较大，圆球形颗粒容易填充均匀，可以使得到的外泌体吸附物质比较均匀，能够更好的分离血清和外泌体。因此选择全多孔硅胶微球或高分子多孔微球作为基质均能较好的负载核酸适配体,从而能够更好的与外泌体结合，进而达到比较理想的去除外泌体的效果，降低血清中的外泌体对研究血清时的影响。

第二方面，本申请提供了用于去除血清中的外泌体的过滤装置，包括装置主体、固定相和过滤件，所述固定相填充于装置主体内部，所述固定相为上述所述的外泌体吸附物质；所述过滤件设置于装置主体的一端。

通过采用上述技术方案，固定相填充于装置主体内，血清通过固定相时，固定相可以与血清中的外泌体结合从而将外泌体留在装置主体内，将血清和外泌体分离，可以得到外泌体含量极少的血清，过滤件可进一步将血清中残留的少量外泌体和微生物除去。

优选的，所述装置主体包括柱体、前封端和后封端，所述前封端设置于柱体远离过滤件的一端，所述后封端设置于柱体与过滤件之间。

通过采用上述技术方案，前封端和后封端用于保护柱体内的固定相，从而降低固定相流失的可能。

优选的，所述前封端与柱体螺纹连接，所述前封端远离柱体的端面设置有第一凸出端，所述第一凸出端的端面直径小于柱体的端面直径,所述第一凸出端螺纹连接有螺帽。