[发明专利]去除血清中外泌体的方法及过滤装置有效
申请号: | 202210046567.7 | 申请日: | 2022-01-17 |
公开(公告)号: | CN114073865B | 公开(公告)日: | 2022-11-25 |
发明(设计)人: | 姜维;胡春苗;吴庆军 | 申请(专利权)人: | 深圳市达科为生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N15/115 | 分类号: | C12N15/115;B01D17/02;B01D17/038;G01N1/40 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 刘燚 |
地址: | 518000 广东省深圳市坪山区坑梓街道金*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 去除 血清 中外 方法 过滤 装置 | ||
1.过滤装置,其特征在于,包括装置主体(1)、固定相(12)和过滤件(2),所述固定相(12)填充于装置主体(1)内部,所述固定相(12)为外泌体吸附物质,所述外泌体吸附物质为负载有核酸适配体的基质;所述核酸适配体为能够特异性识别外泌体表面的跨膜蛋白CD9/CD63/CD81的核酸适配体,所述核酸适配体的序列为ATATACACCCCACCTCGCTCCCGTGACACTAATGCTATTTTTT;所述基质为全多孔硅胶微球;所述过滤件(2)设置于装置主体(1)的一端;所述装置主体(1)包括柱体(11)、前封端(13)和后封端(14),所述前封端(13)设置于柱体(11)远离过滤件(2)的一端,所述后封端(14)设置于柱体(11)与过滤件(2)之间;所述前封端(13)与柱体(11)螺纹连接,所述前封端(13)远离柱体(11)的端面设置有第一凸出端(131),所述第一凸出端(131)的端面直径小于柱体(11)的端面直径,所述第一凸出端(131)螺纹连接有螺帽(132);使用所述过滤装置去除血清中外泌体的方法,包括以下步骤:
S1.将血清进行超速离心,收集血清上清液;
S2.将收集到的血清上清液通过所述的外泌体吸附物质进行吸附处理,得到处理后的血清上清液;
S3.收集处理后的血清上清液并进行过滤;
S4.将过滤后的血清上清液进行无菌处理并进行封装;
在步骤S3中,使用滤膜过滤,所述滤膜的孔径不大于0.22μm;
在步骤S2和步骤S3中,使用了所述过滤装置;
所述后封端(14)与柱体(11)螺纹连接,所述后封端(14)远离柱体(11)的端面设置有第二凸出端(141),所述第二凸出端(141)的端面直径小于柱体(11)的端面直径;所述过滤件(2)螺纹连接于第二凸出端(141);
所述过滤件(2)包括过滤层(21)、进样端(22)和出样端(23),所述过滤层(21)设置于进样端(22)和出样端(23)之间,所述进样端(22)螺纹连接于第二凸出端(141);
所述出样端(23)设置为锥形出口(231),所述锥形出口(231)上设置有阀门(3);
所述过滤装置的制作方法,包括以下步骤:
Z1.将柱体进行反复清洗并烘干;
Z2.将上述所述的外泌体吸附物质作为固定相,并进行预处理;
Z3.将后封端螺旋安装于柱体上,并将固定相在高压下填充入柱体,压实;
Z4.将前封端螺旋安装于柱体远离后封端的一端;
Z5.对固定相进行老化处理;
Z6.将过滤件安装于后封端的第二凸出端上,再将阀门安装于出样端;
在步骤Z1中,依次使用20%~25%的氢氧化钠洗液、10%~15%的盐酸溶液和超纯水反复清洗,在100~120℃下烘干;
在步骤Z5中,将此高压过滤装置的第一凸出端连接氮气,并在100~120℃下氮气流入2~3h,冷却。
2.根据权利要求1所述的过滤装置,其特征在于,所述柱体(11)为玻璃套管或不锈钢套管。
3.根据权利要求1所述的过滤装置,其特征在于,所述柱体(11)的直径不小于5厘米。
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