[发明专利]修复典型异味污染农药场地的混合菌剂及制备方法和应用

权利要求书

1.一种修复典型异味污染农药场地的混合菌剂，其特征在于，所述混合菌剂包括用于降解苯的第一高效降解菌，用于降解二甲基二硫醚的第二高效降解菌以及用于降解乙酰甲胺磷的第三高效降解菌；

其中，所述第一高效降解菌的分离筛选方法包括以下步骤：

S101、取25g试验土样置于锥形瓶中，并加入100mL的超纯水，放3～5粒玻璃珠，在100～140r/min，25～35℃的恒温摇床上进行震荡混匀；

S102、24h后取出锥形瓶并静置10～15min，吸取0.5mL上清液置于LB固体培养基上，并用玻璃棒进行四周旋转涂抹，将所有的试验土样进行相同操作后，置于恒温培养箱，25～35℃倒置培养48h；

S103、观察LB平板的菌落形态，并且从LB平板上挑取不同的菌落进行单菌落分离，涂布LB平板，培养48h；

S104、经过连续2～4次单菌落分离纯化后，挑取单菌落在LB液体培养基中培养48h，待菌液浑浊，得到第一高效降解菌。

2.根据权利要求1所述的混合菌剂，其特征在于，所述第一高效降解菌为红球菌；所述第二高效降解菌为枯草芽孢杆菌；所述第三高效降解菌为芽孢杆菌。

3.根据权利要求1所述的一种修复典型异味污染农药场地的混合菌剂的制备方法，其特征在于，对第一高效降解菌、第二高效降解菌、第三高效降解菌分别进行包覆处理，得到第一高效降解菌小球、第二高效降解菌小球以及第三高效降解菌小球，随后根据典型异味污染农药场地情况按比例将第一高效降解菌小球、第二高效降解菌小球以及第三高效降解菌小球混合得到混合菌剂。

4.根据权利要求3所述的一种修复典型异味污染农药场地的混合菌剂的制备方法，其特征在于，所述包覆处理具体为：利用牛肉膏蛋白胨培养基分别将相同剂量的第一、第二、第三高效降解菌进行固定，并制备成5-10mm粒径的第一、第二、第三固体小球，并对第一固体小球进行电活性聚合物包覆，对第二固体小球进行糯米纸包覆，对第三固体小球进行凝胶包覆，得到第一高效降解菌小球、第二高效降解菌小球和第三高效降解菌小球。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一高效降解菌小球的电活性聚合物制备以及包覆方法，具体包括以下步骤：

1)按质量比为5～7：3称取纸浆纤维素和壳聚糖，混合后按照每克混合物添加20～30mL的比例加入三氟乙酸，室温下密封放置5～7天，随后离心分离得到浆液，将浆液倒入浇铸成膜，室温下干燥48h，待用；

2)利用牛肉膏蛋白胨培养基分别将第一高效降解菌进行固定，并制备成5-10mm粒径的第一固体小球，待用；

3)将步骤1)所制备的膜分别通过酸液、碱液浸泡处理2～3h，随后使用去离子水反复冲洗后进行灭菌处理，将灭菌后的膜包覆在第一固体小球上，得到膜包覆后的第一固体小球，

其中，所述酸液为0.1mol/L的HCl水溶液，碱液为0.1mol/L的NaOH水溶液；

4)将膜包覆后的第一固体小球在室温下干燥10～30min，随后对膜包覆所形成的壳衣进行表面喷涂膜电极涂层，并在壳衣上开设若干细缝，得到第一高效降解菌小球。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述糯米纸选用市售糯米纸，所述凝胶选择琼脂糖凝胶。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一固体小球、第二固体小球、第三固体小球的粒径均为5-10mm。

8.根据权利要求1所述的一种修复典型异味污染农药场地的混合菌剂的应用，其特征在于，将混合菌剂应用于典型异味污染农药场地的修复处理。