[发明专利]一种免疫佐剂及其在乙肝治疗性疫苗中的应用

说明书

本发明公开了一种免疫佐剂及其在乙肝治疗性疫苗中的应用，属于生物技术领域。本发明以乙肝表面抗原作为疫苗的抗原部分，利用酿酒酵母细胞裂解物和氢氧化铝联合作为疫苗的佐剂部分。本发明动物实验结果证明，该疫苗不但能够在小鼠体内诱生Th1方向的免疫应答，而且还能够增强Th2方向的免疫应答。本发明弥补了氢氧化铝作为佐剂不能诱生Th1型免疫应答的不足。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及利用酿酒酵母细胞裂解物(Yeast)和氢氧化铝(Alum)联合作为免疫佐剂及其在乙肝治疗性疫苗中的应用。本发明提供了一种增强乙肝表面抗原(HBsAg)特异性细胞及体液免疫反应的新策略。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染是世界性的公共卫生问题，其所致的慢性肝炎及其并发症严重危害着人类的健康。目前，临床上对慢性肝炎的治疗主要是采用干扰素α和核苷类药物，但治疗效果均不理想。

目前使用的乙肝疫苗主要由两部分组成，乙肝抗原和佐剂，单独乙肝抗原的免疫原性较弱，佐剂用于增强抗原的免疫原性。目前被批准能够应用于临床的氢氧化铝佐剂，其主要增强Th2型免疫应答，主要起到预防乙肝感染的作用，没有治疗作用。

近些年，出现了许多治疗性乙肝疫苗的研究，Th 1型免疫以较强的细胞免疫和适度的体液免疫反应为特点，在宿主抵抗病毒感染方面起重要作用。因此，开发一种安全的，能够增强Th l型免疫应答的佐剂，对控制乙肝具有重要的意义。

TOLL样受体(TLRs)属于病原相关分子模式识别受体(PRR)，PRR识别某些病原微生物或其产物所共有的高度保守的特定分子结构称为病原相关分子模式(PAMP)，不仅能激活先天性免疫应答，而且还能促进抗原提呈细胞(APCs)识别病原体，产生共刺激信号而启动获得性免疫反应，是联系先天性免疫和获得性免疫的桥梁。

树突状细胞(DCs)表面表达多种TLRs，在识别病原微生物表面PAMP方面起重要作用。酿酒酵母细胞壁有很多佐剂成分，其能够与DCs受体(如TLR2、TLR4、TLR6等)相互作用，可上调DC细胞表面分子的表达，刺激细胞因子IL-12的分泌(Stubbs AC,Martin KS,NatMed2001；7(5)：625-9)。

我们的前期研究表明，表达乙肝表面抗原的汉逊酵母细胞能够在小鼠体内产生较强的乙肝特异性体液及细胞免疫应答，证明了酵母细胞有很强的佐剂效果(CN102038948A)。近些年，有学者利用表达乙肝抗原的全酿酒酵母作为疫苗，治疗慢性乙肝患者，该疫苗虽然在慢性乙肝患者体内体现出较好的安全性及耐受性，但没有显示出明显的乙肝治疗效果(Anna S.Lok，2016；65(3):509-16)，该疫苗治疗效果不理想可能与乙肝抗原在该酿酒酵母细胞中的表达量有关，另外，乙肝抗原与酿酒酵母细胞间的比例也会影响该疫苗的治疗效果，然而，该疫苗的乙肝抗原表达在酿酒酵母细胞内，很难对该疫苗的乙肝抗原的表达量、乙肝抗原与酿酒酵母细胞的比例进行调整，因此，需要对该疫苗的工艺进行改进及优化。在前期专利中(CN 102038948 A)，我们利用表达乙肝表面抗原的汉逊酵母细胞作为疫苗，从理论上讲，汉逊酵母细胞比酿酒酵母细胞更加安全，酿酒酵母细胞容易导致过敏反应。但近些年来，只有见到全酿酒酵母细胞作为疫苗在人体中安全性的验证报道(AnnaS.Lok，2016；65(3):509-16)，因此在本专利中改用酿酒酵母细胞作为佐剂的来源。