[发明专利]检测52型和58型HPV的LAMP引物组合、反应体系和方法

说明书

本发明公开了一种检测52型和58型HPV的LAMP引物组合、反应体系和方法。本发明提供的引物组合、反应体系和方法用于HPV52和HPV58的核酸检测，采用SYBR Green染料进行荧光PCR仪器检测和可视化的染色显色检测，在55℃～65℃条件下均可实现靶基因的有效扩增及检测，不需变温和复杂仪器；能快速获得检测结果，30min内即可完成反应，特异性为100％，检测灵敏度为10～50copies/mL。操作简单、快速、灵敏，对硬件要求低，成本较低，有利于制备成试剂盒用于广泛推广，为HPV52和HPV58的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有重要意义。

技术领域

本发明属于病毒分子生物学领域，具体涉及一种检测52型和58型HPV的LAMP引物组合、反应体系和方法。

背景技术

宫颈癌是全球女性癌症死亡的第二大原因。长期持续性感染高危基因型人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈癌前病变后续发展的关键因素。上世纪末，宫颈液基薄层细胞学(TCT)作为宫颈癌的初筛在临床广泛应用，宫颈癌的发病率呈下降趋势。但由于TCT的灵敏度较低，近年来研究发现，宫颈癌的发病风险与人乳头瘤病毒(HPV)感染有关，尤其是高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染是高级别宫颈病变(HSIL)及宫颈癌发生发展的必要条件。今年来，HPV52、58发病率较高。

对HPV52、58检测能在病毒感染的初期发现病毒，将宫颈病变的高危人群筛查出来，增加HSIL和早期宫颈癌的检出率。临床上除了对HPV16、18感染需高度重视外，还应该重视HPV52、58感染，对具有进展为HSIL的高风险HPV(16、18、52、58)识别，能进一步预测宫颈病变的进展和预后，对指导制定个性化的随诊和治疗方案有重大意义。

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种用于等温扩增核苷酸目标的越来越受欢迎的替代方法。LAMP反应基于Bst DNA聚合酶在60℃到70℃温度范围内的等温条件下进行的链置换扩增，这需要一组四(或六)种不同的引物与靶基因上的六(或八)个不同区域结合，才能进行检测。Lamp引物组由两个外部引物(正向外部引物F3和反向外部引物B3)、两个内部引物(正向内部引物FIP和反向内部引物BIP)和最终1-2个环引物(环正向引物LF或/和环向后引物LB)，这样设计可进一步缩短扩增时间。因此，可以使用至少一组四个引物，它们严格识别目标序列上的六个不同区域，范围在580bp到200bp之间，确保高特异性。LAMP方法在阳性样品检测中可以产生大量扩增产物，可以通过琼脂糖凝胶电泳或通过目测颜色变化来检测。LAMP反应可以在30～60分钟内完成，使得任何实验室都只需要简单且廉价的仪器(例如水浴或金属浴)即可进行核酸检测。LAMP的主要优点是：设备最少，高灵敏度和检测时间快速(少于60分钟)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测52型和58型HPV的LAMP引物组合、反应体系和方法。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提供一种LAMP检测引物组，包括HPV52的引物组和/或HPV58的引物组；

所述HPV52的引物组的核酸序列如下所示：

外引物：

F3：CACTGTACAAAGCAGTG(SEQ ID NO.1)；

B3：AATGTATGTCATAACATCAGC(SEQ ID NO.2)；

内引物：

FIP：TATTGTGGCCCTGCGCACGTTTTTTCTATGGTAACCTCAGAATC(SEQ ID NO.3)；

BIP：CACTCGTAGCACTAACATGACTTTTTCGCCATGACGAAGGTATTCC(SEQ ID NO.4)；

环引物：