[发明专利]α-1,2葡聚糖的纯化方法、α-1,2葡聚糖及其应用

说明书

α‑1,2葡聚糖的纯化方法、α‑1,2葡聚糖及其应用，属于酶工程领域，包括：将蓝藻裂解，收集含α‑1,2葡聚糖的上清；加乙醇，静置、收集α‑1,2葡聚糖沉淀并冻干；加水溶解沉淀，透析后，加乙醇，静置、收集α‑1,2葡聚糖沉淀并冻干；DEAE‑纤维素离子交换层析；薄层层析检测α‑1,2葡聚糖出峰位置；混合含α‑1,2葡聚糖的洗脱峰，加乙醇，静置、收集α‑1,2葡聚糖沉淀并冻干；凝胶过滤层析；薄层层析检测α‑1,2葡聚糖出峰位置；混合含有α‑1,2葡聚糖的洗脱峰，加乙醇，静置、收集α‑1,2葡聚糖沉淀并冻干；加水溶解得纯化的α‑1,2葡聚糖。该纯化方法适用于工业大规模、大量纯化α‑1,2葡聚糖。

技术领域

本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种α-1,2葡聚糖的纯化方法、α-1,2葡聚糖及其应用。

背景技术

已有两篇文章(FEBS J.2006 Jan；273(1):137-49.和Plant Science 172(2007)29–35)公开报道了纯化α-1,2葡聚糖的方法，但是这些方法中用了许多昂贵的纯化材料，包括Bio-Gel P2(2cm*230cm)、Bio-Gel P4(2.05cm*191cm)、CarboPac PA1 column(4mm*250mm)、Glass fiber filters(MN GF-1,Macherey-Nagel公司)等。这些层析柱或者材料价格十分昂贵，并且分离α-1,2葡聚糖的量非常小，仅能获得克级以下量的α-1,2葡聚糖，只适用于实验室小量生产，不适用于工业大批量生产。另外，以上报道的纯化方法步骤及其繁琐，也不适用于工业生产。

截止目前，还没有公开适用于大量提取纯化α-1,2葡聚糖的方法，这不利于α-1,2葡聚糖的实际应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种α-1,2葡聚糖的纯化方法、α-1,2葡聚糖及其应用。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的α-1,2葡聚糖的纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、将蓝藻与水混合后进行裂解处理，蓝藻与水的重量比为1:10～10:1；

步骤二、收集含有α-1,2葡聚糖的上清；

步骤三、向上清中加入90～100％乙醇，上清与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤四、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；

步骤五、加水溶解冻干α-1,2葡聚糖沉淀，置于透析膜中透析24～48h；

步骤六、向溶液中加入90～100％乙醇，溶液与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤七、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；

步骤八、DEAE-纤维素离子交换层析去除杂质，分离α-1,2葡聚糖；

步骤九、薄层层析检测α-1,2葡聚糖在DEAE-纤维素离子交换层析的出峰位置；

步骤十、混合含有α-1,2葡聚糖的洗脱峰，向混合液中加入90～100％乙醇，混合液与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤十一、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；

步骤十二、凝胶过滤层析进一步去除杂质，分离纯化α-1,2葡聚糖；

步骤十三、薄层层析检测α-1,2葡聚糖在凝胶过滤层析的出峰位置；

步骤十四、混合含有α-1,2葡聚糖的洗脱峰，向混合液中加入90～100％乙醇，混合液与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；