[发明专利]α-1,2葡聚糖的纯化方法、α-1,2葡聚糖及其应用

权利要求书

1.α-1,2葡聚糖的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将蓝藻与水混合后进行裂解处理，蓝藻与水的重量比为1:10～10:1；

步骤二、收集含有α-1,2葡聚糖的上清；

步骤三、向上清中加入90～100％乙醇，上清与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤四、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；

步骤五、加水溶解冻干α-1,2葡聚糖沉淀，置于透析膜中透析24～48h；

步骤六、向溶液中加入90～100％乙醇，溶液与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤七、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；

步骤八、DEAE-纤维素离子交换层析去除杂质，分离α-1,2葡聚糖；

步骤九、薄层层析检测α-1,2葡聚糖在DEAE-纤维素离子交换层析的出峰位置；

步骤十、混合含有α-1,2葡聚糖的洗脱峰，向混合液中加入90～100％乙醇，混合液与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤十一、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；

步骤十二、凝胶过滤层析进一步去除杂质，分离纯化α-1,2葡聚糖；

步骤十三、薄层层析检测α-1,2葡聚糖在凝胶过滤层析的出峰位置；

步骤十四、混合含有α-1,2葡聚糖的洗脱峰，向混合液中加入90～100％乙醇，混合液与乙醇的体积比为1:10～10:1，静置1～48h，使α-1,2葡聚糖沉淀；

步骤十五、收集α-1,2葡聚糖沉淀并冻干；加水溶解冻干α-1,2葡聚糖沉淀得到纯化的α-1,2葡聚糖。

2.根据权利要求1所述的α-1,2葡聚糖的纯化方法，其特征在于，步骤一中，所述裂解处理的方法为：80～200℃加热10min～4h，或采用超声破碎仪进行超声破碎5～60min，功率设为10～80％，或采用超高压连续流细胞破碎机进行高压破碎，压力设为50～200Mpa。

3.根据权利要求1所述的α-1,2葡聚糖的纯化方法，其特征在于，步骤三中，向上清中加入90％乙醇，上清与90％乙醇的体积比为1:2，静置1h，使α-1,2葡聚糖沉淀。

4.根据权利要求1所述的α-1,2葡聚糖的纯化方法，其特征在于，步骤六中，溶液为透析袋外边的水溶液，该水溶液中含有α-1,2葡聚糖；向该溶液中加入90％乙醇，溶液与90％乙醇的体积比为1:2，静置1h，使α-1,2葡聚糖沉淀。

5.根据权利要求1所述的α-1,2葡聚糖的纯化方法，其特征在于，步骤八中，所述DEAE-纤维素离子交换层析的具体操作步骤如下：

根据DEAE-纤维素的说明书对DEAE-纤维素进行使用前处理；溶解α-1,2葡聚糖沉淀后，离心去除不溶解的沉淀；将上清上样于DEAE-纤维素离子交换柱中；采用双蒸水对DEAE-纤维素离子交换柱进行清洗，流速为1ml/min；洗脱方法为氯化钠梯度洗脱，氯化钠浓度为0～0.5M，流速为1ml/min，每5ml收集一次，收集的样品用薄层层析进行检测。

6.根据权利要求1所述的α-1,2葡聚糖的纯化方法，其特征在于，步骤九和步骤十三中，所述薄层层析的具体操作步骤如下：

裁剪硅胶板，四边平行；铅笔划线，距离下边缘10mm；毛细管上样，上样1-10μl，垂直上样，自然干燥；展开剂展开，所述展开剂由体积比为4:3:1的正丁醇、丙酮、水组成，展开剂不高于下边缘划线处，展开结束后，取出自然干燥；将硅胶板放入显色剂中完全浸没，所述显色剂由体积比为5:5:1的2％苯胺丙酮溶液、2％二苯胺丙酮溶液、85％磷酸组成，去除自然干燥，放入70～85℃烘箱显色10～15min。