[发明专利]一种具备免疫激活功能的抗癌纳米药物及其制备方法

权利要求书

1.一种负载甘草次酸(GA)的细胞膜包被的聚(D,L-乳酸-co-乙醇酸)(PLGA)的纳米药物(GCMNPs)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取U937细胞膜泡；

2)合成GA/PLGA载药纳米核；

3)融合细胞膜囊泡与载药GA/PLGA纳米粒子，即得GCMNPs。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)包括：取细胞用PBS洗涤，将细胞悬浮在低温低渗裂解缓冲液中，并用聚碳酸酯膜微挤出机挤出，所得细胞匀浆、离心，收集上清液，再离心，留上清液，再用超速离心机离心，所得为纯化的细胞膜，保存备用。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述低温低渗裂解缓冲液的组成为20mM Tris-HCl，pH 7.4；0.10mM MgCl₂；10mM KCl；胰蛋白酶裂解液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)包括：将PLGA和GA溶解于有机溶剂中，将该混合液用注射泵以20mL h^-1逐滴加入到25mL 1％聚乙烯醇(PVA)中，在1％PVA中迅速乳化，边加边用磁力搅拌器搅拌直至有机溶剂完全挥发，离心，洗涤所合成的纳米药，最后把上清液保留在PBS中，得到纯化后的GA/PLGA核。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中的有机溶剂优选丙酮。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)包括：通过挤压作用细胞膜，将步骤2)所得的GA/PLGA纳米核包裹在其中，获得GCMNPs纳米药。

7.根据权利要求1所述的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1)取1×10⁹个细胞，用1×PBS洗涤3次，将细胞悬浮在低温低渗裂解缓冲液中，并用聚碳酸酯膜微挤出机挤出20次，所得细胞匀浆在4℃条件下用3200g进行离心5min，收集上清液，再用20000g离心30min，留上清液，再用超速离心机，在80000g条件下离心1.5h，最后所得为纯化的细胞膜，保存在4℃，备用；

2)25mg PLGA和2mg GA溶解于丙酮中，将该混合液逐滴加入到25mL 1％聚乙烯醇(PVA)中，在1％PVA中迅速乳化，边加边用磁力搅拌器搅拌直至丙酮完全挥发，磁力搅拌器转速为500rpm，以12000rpm离心3次，每次离心30min来洗涤所合成的纳米药，最后把上清液保留在PBS中，得到纯化后的GA/PLGA纳米核。

3)通过挤压作用步骤1)所得的细胞膜，将步骤2)所得的GA/PLGA纳米核包裹在其中，获得GCMNPs纳米药。

8.一种根据权利要求1-7中任一项所述制备方法制备得到的抗实体瘤及血液瘤的靶向性的负载甘草次酸的纳米仿生药GCMNPs。