[发明专利]轮环藤酚碱的制备方法

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种轮环藤酚碱的制备方法，该方法包括：将粉防己采用乙醇水溶液进行提取，制备粉防己浸膏；将粉防己浸膏进行酸溶碱沉处理，然后加入有机溶剂进行萃取，收集碱液部位；将碱液部位的酸碱度调为中性，加入正丁醇进行萃取，收集正丁醇部位；将正丁醇部位中的水溶性生物碱吸附到拌样用的氧化铝粉末上，得到拌样粉末；将拌样粉末进行装柱，然后进行氧化铝柱层析，采用二氯甲烷‑甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，收集含轮环藤酚碱的流分，将流分进行结晶处理，收集晶体。通过上述方法可实现从粉防己中提取得到高纯度的轮环藤酚碱。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种轮环藤酚碱的制备方法。

背景技术

防己(StephaniaeTetrandrae Radix)是防己科植物粉防己(StephaniatetrandraS.Moore)的干燥根，已有的研究显示，防己及其生物碱类效在解热、镇痛、抗炎和利尿等方面具有确切的治疗效果，并发现其在治疗高血压、血管性痴呆、心绞痛、纤维化和肿瘤防治等方面具有良好的应用前景。然而，这些研究主要是针对防己的脂溶性成分，由于粉防己水溶性生物碱的水溶性强，难以分离、纯化，目前国内对于粉防己水溶性生物碱的分离纯化报道尚少。因此，对建立防己水溶性生物碱的提取、纯化方法有助于进一步揭示其相关物质基础及药理学机制。

正丁醇萃取是水溶性成分的常规分离纯化方法，但是，由于轮环藤酚碱的特殊性质，粉防己的正丁醇萃取部位仍然有较多的水溶性杂质干扰，难以获得结晶。也有报道采用中压制备色谱，对粉防己的水溶性生物碱进行针对性的分离，然而，由于所用仪器、设备特殊性，难以普及使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种轮环藤酚碱的制备方法，以获得高纯度的轮环藤酚碱。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种轮环藤酚碱的制备方法，包括以下步骤：

将粉防己采用乙醇水溶液进行提取，制备粉防己浸膏；

将所述粉防己浸膏进行酸溶碱沉处理，然后加入有机溶剂进行萃取，收集碱液部位；

将所述碱液部位的酸碱度调为中性，加入正丁醇进行萃取，收集正丁醇部位；

将所述正丁醇部位中的水溶性生物碱吸附到拌样用的氧化铝粉末上，得到拌样粉末；

将所述拌样粉末进行装柱，然后进行氧化铝柱层析，采用二氯甲烷-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，收集含轮环藤酚碱的流分，将所述流分进行结晶处理，收集晶体。

本发明提供的上述轮环藤酚碱的制备方法，首先，采用乙醇水溶液进行提取，以富集粉防己中的活性成分；然后，通过进行酸溶碱沉处理富集生物碱活性成分，其后加入有机溶剂进行萃取并收集碱液部位，以去除脂溶性生物碱，使得碱液部位主要为水溶性生物碱，避免脂溶性生物碱的干扰；在将碱液部位的酸碱度调为中性后加入正丁醇进行萃取，使得水溶性生物碱富集在正丁醇部位；之后，将正丁醇部位进行拌样，然后进行氧化铝柱层析，且采用二氯甲烷-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，使得轮环藤酚碱在洗脱过程中实现与其他水溶性生物碱的有效分离，从而得到水溶性杂质含量低的目标流分，进而通过结晶处理获得高纯度的轮环藤酚碱。

一些实施例中，采用200-300目的中性氧化铝进行装柱，采用二氯甲烷-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱的流速为1-5mL/min。

一些实施例中，将所述拌样粉末进行装柱的步骤中，装柱用的氧化铝粉末与拌样用的氧化铝粉末的重量比为(8-12):1。

一些实施例中，采用二氯甲烷-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱的步骤中，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比为10:(0-4)。

一些实施例中，收集含轮环藤酚碱的流分的步骤中，收集所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比为10:(1-2)的流分。