[发明专利]犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂

说明书

本发明提供犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂，涉及病毒检测技术领域。该犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂，包括CPV/CCV二联检测试剂卡和样本稀释液；所述CPV/CCV二联检测试剂卡包括试剂卡本体和试剂卡本体上依次设置的加样孔、结合垫、NC膜，所述结合垫中含有荧光标记的荧光微球，所述荧光微球包括偶联犬冠状病毒抗体的微球和偶联犬细小病毒抗体的微球。通过采用双抗体夹心法检测犬类粪便中的犬细小/犬冠状病毒浓度，将测试样本加入到稀释液中混匀，滴加到加样孔内，抗原会随着样本稀释液扩散到结合垫上，与荧光标记的抗体相结合，实现对犬冠状病毒和细小病毒进行同时检测，检测准确，效果良好。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体为犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂。

背景技术

犬冠状病毒为单股正链RNA病毒，有6～7种多肽，其中4种是糖肽，不含RNA聚合酶及神经氨酸酶，犬冠状病毒(Canine Coronavirus，CCV)是一种严重危害养犬业、经济动物养殖业和野生动物保护的病毒性传染病病源。犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)是1978年澳大利亚的Kelly和加拿大的Thomson等同时从患肠炎的病犬粪便中分离获得的，从发现该病毒，世界各地均有流行，是危害犬类的最主要的烈性传染病之一。犬冠状病毒常和细小病毒一起混合感染，构成犬腹泻大流行。目前犬细小病毒病的诊断多采用胶体金法快速诊断试纸进行。此法简便快速，准确率高。用棉签蘸取病犬的粪便或呕吐物浸入装有生理盐水的塑料管中混匀，将3～4滴上清液滴于试纸反应孔内，静置3～5min，如C和T对应处均出现红线为阳性。

但是传统的胶体金法使用的样本稀释液无法有效稀释动物粪便或呕吐物，影响后续的正常检测，无法对犬冠状病毒和细小病毒进行同时检测，检测效果差。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂，解决了传统的胶体金法使用的样本稀释液无法有效稀释动物粪便或呕吐物，无法对犬冠状病毒和细小病毒进行同时检测，检测效果差的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂，包括CPV/CCV二联检测试剂卡和样本稀释液；

所述CPV/CCV二联检测试剂卡包括试剂卡本体和试剂卡本体上依次设置的加样孔、结合垫、NC膜，所述结合垫中含有荧光标记的荧光微球，所述结合垫与NC膜的一端相连接，所述NC膜中部设置有T线，所述NC膜的另一端设置有C线，所述加样孔用于添加所述样本稀释液；

所述荧光微球包括偶联犬冠状病毒抗体的微球和偶联犬细小病毒抗体的微球；

所述样本稀释液由以下原料组成：牛血清白蛋白1～2％、叠氮化钠0.1～1％、聚多卡醇0.1～0.5％、柠檬酸三钠0.2～0.55％、柠檬酸0.15～0.18％、硫氰酸胍0.1-1％、余量为纯化水。

优选的，还包括移液器吸头、棉签，所述移液器吸头用于将样本稀释液缓缓滴入于试剂卡本体的加样孔中，所述棉签用于样本的采样。

优选的，所述样本稀释液由以下原料组成：0.3g/mL牛血清白蛋白1-2％、0.1g/mL叠氮化钠0.1-1％、0.2g/mL聚多卡醇0.1-0.5％、0.8g/mL柠檬酸三钠0.2-0.55％、0.6g/mL柠檬酸0.15～0.18％、0.01～0.1g/mL硫氰酸胍0.1-1％、余量为纯化水。

优选的，所述的犬冠状病毒二联荧光定量检测试剂的检测方法，包括以下步骤：

步骤一、采用双抗体夹心法检测犬类粪便中的犬细小/犬冠状病毒浓度，将测试样本加入到稀释液中混匀，滴加到加样孔内，抗原会随着样本稀释液扩散到结合垫上，与荧光标记的抗体相结合，形成复合物；