[发明专利]一种以金纳米团簇为发光体实施缺陷诱导型单色电化学发光免疫分析的方法

说明书

本发明涉及一种以金纳米团簇为发光体实施缺陷诱导型单色电化学发光免疫分析的方法，利用11‑巯基十一烷酸为单一包被剂制备了水溶性一元金纳米团簇，以金纳米团簇/水合肼ECL体系发展了以单一巯基烷酸包被金纳米团簇为发光团的ECL生化分析。本发明的11‑巯基十一烷酸包被的金纳米团簇MUA‑AuNCs在用于电化学发光时只有一个波段峰，属于完全由缺陷诱导的电化学发光。对电化学发光的调控，无需采用调控贵金属纳米团簇的尺寸的方法，仅仅改变含巯基的长直链烷酸碳链长度对金纳米团簇表面状态进行调控，即可完成电化学发光的控制，方法灵活，调控易于操作。

技术领域

本发明属于分析技术方法领域，涉及一种以11-巯基十一烷酸包被金纳米团簇为标记物、水合肼为共反应剂的电化学发光免疫分析方法。

背景技术

电化学发光(ECL)生化分析具有灵敏度高、线性范围宽、仪器操作简单等优点，已在化学、医学和体外诊断等领域得到广泛应用(Chem.Rev.2014,114,11027)。近十年来，纳米粒子正在逐步取代传统的分子类ECL发光试剂，成为ECL生化分析的主流发光试剂和标记物(Chem.Rev.2008,108,2506)。

纳米粒子ECL分为禁带调控和缺陷诱导两种类型(Chem.Commun.2020,56,5665–5668)。禁带调控型ECL光谱与纳米粒子荧光光谱高度一致，缺陷诱导型ECL光谱相对于纳米粒子荧光光谱产生明显红移。禁带调控和缺陷诱导型ECL同时存在的现象导致纳米粒子ECL通常表现为双波段辐射(Nano Lett.2003,3,1053)。研发单色ECL体系是提高ECL生化分析通量的有效途径，学术界通常采用抑制纳米粒子表面缺陷的方式，实施以纳米粒子为标记物的禁带调控型ECL生化分析(Anal.Chem.2018,90,12361)。

采用有效方式抑制纳米粒子的禁带调控型ECL，开发以纳米粒子为发光物的缺陷诱导型单色ECL体系能够进一步丰富ECL单色体系，推动单色ECL生化分析的发展(Anal.Chem.2018,90,3563)。贵金属纳米团簇是一类新型的ECL发光材料，具有良好的稳定性和生物相容性。CN112122621B公开了一种以双支链巯基烷酸——蛋氨酸为包被剂的金银双金属纳米团簇的制备方法，采用向金纳米团簇中引入银元素的方式构建了金银双金属纳米团簇，并据此实现缺陷诱导型单波段ECL，实施了单波段ECL生化分析(CN112147132B)。Jia等以双稳定剂包被金纳米团簇为发光团实现了缺陷诱导型单波段ECL辐射(ACSAppl.Nano Mater.2021,4,2657)。

目前，学术界尚未明确包被剂碳链在实现缺陷诱导型ECL过程中的作用，基于直链巯基烷酸包被剂直接实现金纳米团簇缺陷诱导型ECL的方法与手段有限。

发明内容

针对现有技术的不足，尤其是基于单一直链巯基烷酸包被剂直接实施金纳米团簇缺陷诱导ECL的技术手段的不足，本发明提供一种以直链巯基烷酸为包被剂制备金纳米团簇、实施缺陷诱导型单波段ECL生化分析的方法。利用11-巯基十一烷酸为单一包被剂制备了水溶性一元金纳米团簇，以金纳米团簇/水合肼ECL体系发展了以单一巯基烷酸包被金纳米团簇为发光团的ECL生化分析。

术语说明：

抗原：本发明所述的抗原(Ag)指甲胎蛋白抗原，癌胚抗原，前列腺特异性抗原，糖类抗原125等常规的抗原。

一抗：本发明所述的一抗(Ab₁)指对本发明所述抗原对应产生的抗体，本发明对于上述抗原对应的单克隆抗体效果更好。

二抗：本发明所述的二抗(Ab₂)指对上述抗原和一抗对应产生的二抗。

U的定义：在实验规定的条件下，如最适温度、最适pH、最适底物浓度时，1min内催化1μmol底物发生反应所需要的酶量作为一个酶活力国际单位U。

本发明的技术方案如下：