[发明专利]香菇粉多糖高效液相指纹图谱鉴别方法

说明书

本发明公开了香菇粉多糖高效液相指纹图谱鉴别方法，属于分析化学领域。本发明先建立香菇伞粉的多糖高效液相指纹图谱，然后利用PCA、OPLS‑DA模型，根据香菇伞粉多糖高效液相指纹图谱进行香菇粉的真伪鉴别。本发明建立香菇粉多糖的高效液相指纹图谱，对香菇粉的以次充好和假冒掺假进行定性检测。通过高效液相指纹图谱来鉴别香菇粉，多糖HPLC指纹图谱结合计量学分析可用于香菇粉的质量控制。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及香菇粉多糖高效液相指纹图谱鉴别方法。

背景技术

香菇(Lentinus edodes(Berk.)sing)，属担子菌纲侧耳科真菌,是一种珍贵的食用菌，也是著名的药用菌，其肉质肥厚细嫩，味道鲜美，香气独特，具有很高的营养、药用和保健价值。香菇含有丰富的碳水化合物、蛋白质、膳食纤维、甾体等营养成分；富含人体必需的脂肪酸，可以降低血脂、血清、胆固醇以及抑制动脉血栓的形成。干香菇磨成粉后，除了具有巨大表面积和孔隙率、较好的溶解性和吸附性等优良特性外，还能提高食品加工过程中发酵、酶解的反应速率。香菇中含有一种分子量为100万的抗肿瘤成分—香菇多糖(Lentinan)。

香菇粉掺假是一种新型的掺假现象，常见的掺假包括以次充好和使用其他非香菇粉原料冒充香菇粉。目前国内尚无香菇粉鉴别的技术标准，国内外文献也未检索到香菇制品真实性鉴别的技术文献，存在技术真空地带，所以建立香菇粉掺假鉴别方法迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种香菇粉的高效液相指纹图谱鉴别方法，对香菇粉的以次充好和假冒掺假进行定性检测。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种基于高效液相指纹图谱鉴别香菇粉真伪的方法，包括如下步骤：

(1)香菇粉样品的前处理：

a、多糖的提取和除蛋白：将香菇粉分散在水中，混匀加热，然后固液分离、收集清液；然后加入乙醇溶液进行沉淀，结束后通过固液分离收集沉淀；沉淀分散在水中，加入蛋白酶除蛋白，结束后，灭酶，离心收集清液，获得多糖提取液；

b、多糖的水解：在所得多糖提取液中加入TFA(三氟乙酸)进行水解，水解后，冷却，干燥、收集残渣，并用水定容获得香菇粗多糖水解溶液；

c、PMP衍生化：取香菇粗多糖水解溶液、空白水溶液，分别加入氢氧化钠溶液、PMP甲醇溶液，混匀、进行衍生反应；反应结束后，加入盐酸溶液、混匀，然后再加入三氯甲烷进行洗涤，离心，去除下层的三氯甲烷层、收集上层水层，膜过滤，即得香菇粉供试品溶液；

(2)高效液相检测鉴别：

以乙腈和磷酸盐缓冲液作为流动相，获得香菇粉供试品溶液的多糖高效液相图谱；选择其中保留时间分别为13.8±0.5min、17.8±0.5min、19.2±0.5min、27.±0.5min、30.5±0.5min、 32.7±0.5min和39.5±0.5min处的这7种色谱峰作为特征指纹峰建立指纹图谱，测定相应特征指纹峰的峰面积；然后通过OPLS-DA或PCA分析模型对香菇粉样品的真伪进行鉴别。

在本发明的一种实施方式中，步骤a中，香菇粉分散在水中的浓度为0.02-0.05g/mL。

在本发明的一种实施方式中，步骤a中，混匀加热的温度为90℃；转速为300r/min。

在本发明的一种实施方式中，步骤a中，用4倍体积的95％乙醇在4℃下进行沉淀。

在本发明的一种实施方式中，步骤a中，蛋白酶为木瓜蛋白酶；木瓜蛋白酶相对香菇粉的质量分数为3％。

在本发明的一种实施方式中，步骤a中，灭酶的条件为100℃煮沸10min。