[发明专利]香菇粉多糖高效液相指纹图谱鉴别方法

权利要求书

1.一种基于高效液相指纹图谱鉴别香菇粉真伪的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)香菇粉样品的前处理：

a、多糖的提取和除蛋白：将香菇粉分散在水中，混匀加热，然后固液分离、收集清液；然后加入乙醇溶液进行沉淀，结束后通过固液分离收集沉淀；沉淀分散在水中，加入蛋白酶除蛋白，结束后，灭酶，离心收集清液，获得多糖提取液；

b、多糖的水解：在所得多糖提取液中加入TFA进行水解，水解后，冷却，干燥、收集残渣，并用水定容获得香菇粗多糖水解溶液；

c、PMP衍生化：取香菇粗多糖水解溶液、空白水溶液，分别加入氢氧化钠溶液、PMP甲醇溶液，混匀、进行衍生反应；反应结束后，加入盐酸溶液、混匀，然后再加入三氯甲烷进行洗涤，离心，去除下层的三氯甲烷层、收集上层水层，膜过滤，即得香菇粉供试品溶液；

(2)高效液相检测鉴别：

以乙腈和磷酸盐缓冲液作为流动相，获得香菇粉供试品溶液的多糖高效液相图谱；选择其中保留时间分别为13.8±0.5min、17.8±0.5min、19.2±0.5min、27.±0.5min、30.5±0.5min、32.7±0.5min和39.5±0.5min处的这7个色谱峰作为特征指纹峰建立指纹图谱，测定相应特征指纹峰的峰面积；然后通过OPLS-DA或PCA分析模型对香菇粉样品的真伪进行鉴别。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，香菇粉分散在水中的浓度为0.02-0.05g/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，混匀加热的温度为90℃；转速为300r/min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，用4倍体积的95％乙醇在4℃下进行沉淀。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，蛋白酶为木瓜蛋白酶；木瓜蛋白酶相对香菇粉的质量分数为3％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中，灭酶的条件为100℃煮沸10min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b中，TFA配置成0.4M TFA水溶液，然后加入到多糖提取液中；TFA水溶液与多糖提取液的体积比为1:1。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c中，氢氧化钠溶液的浓度为0.3mol/L；PMP甲醇溶液的浓度为0.5mol/L；盐酸溶液的浓度为0.3mol/L。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c中，衍生反应的温度为70℃。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，色谱的条件包括：ZORBAX Eclipse XDB-C18，规格为250×4.60mm，5μm；流动相为18％乙腈-82％磷酸盐缓冲液；柱温为30℃；流速为0.8mL/min；检测波长为250nm。