[发明专利]一种核桃肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种核桃肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）核桃粕浆用纤维素酶和果胶酶进行酶解，灭酶后过滤干燥，得到核桃蛋白；

（2）核桃蛋白与水按料液比1:18 ~ 22g/mL混合得到核桃蛋白浆，将核桃蛋白浆在50 ~60℃保温，调节pH后依次用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶进行酶解，得到核桃蛋白酶解液；

（3）所述核桃蛋白酶解液中加入活性炭保温、过滤、干燥，得核桃肽混合物；

（4）将核桃肽混合物制备成溶液，采用高效液相色谱分离纯化得到核桃肽GEEREERGLD。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中纤维素酶的添加量为1200 ~ 1800U/mL，果胶酶的添加量为400 ~ 600U/mL，核桃粕浆液在pH值6 ~ 7、温度为50~ 55℃下酶解3 ~5 h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中碱性蛋白酶酶解4.5 ~5.5h后，加入木瓜蛋白酶继续酶解3.5 ~ 4.5h；碱性蛋白酶的添加量为450 ~ 550U/mL，木瓜蛋白酶的添加量为200 ~ 300U/mL，碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶的酶解pH值为8 ~ 8.5、温度为50 ~ 60℃。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中核桃肽混合物配制得到浓度为0.8 ~ 1.2mg/mL的水溶液。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中采用高效液相色谱进行两次分离纯化，以流动相A：水+0.1%三氟乙酸，流动相B：乙腈+0.1%三氟乙酸进行梯度洗脱得到核桃肽GEEREERGLD。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，第一次高效液相色谱条件如下：采用规格为550mm×40μm，20μm的制备型液相色谱柱；流速14 ~ 15mL/min；洗脱程序为0 ~ 5min5%B，5 ~ 15min 5%B ~ 25%B，15 ~ 45min 25% ~ 55%B；收集21 ~ 24min的洗脱流份。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，第二次高效液相色谱条件如下：采用规格为250mm×4.6mm，5μm的Agilent Plus C18色谱柱；流速0.4 ~ 0.5mL/min；洗脱程序为0 ~ 10min 5%B，10 ~ 25min 80%B，25 ~30min 5%B；收集20 ~ 24min的洗脱流份。

8.根据权利要求1 ~ 7任意一项所述方法制备得到的核桃肽在制备神经保护和/或记忆力改善产品中的应用。