[发明专利]一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记及应用

说明书

本发明公开了一种鉴别长吻鮠遗传性别的Indel分子标记，为第7号染色体第1130404位碱基处上一段长32bp的插入/缺失序列，利用特异性引物PCR扩增后获得长吻鮠在雌雄间的差异性产物，从而达到准确鉴定长吻鮠性别目的。本发明可以在长吻鮠胚胎、仔稚鱼、幼鱼及成鱼时期简便、快速、稳定地鉴别遗传性别，有助于长吻鮠单性育种技术的开发，实现长吻鮠的全雄养殖，能在不增加养殖量的前提下大幅度提高产量，从而增加长吻鮠养殖的经济收益。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记及应用。

技术背景

硬骨鱼类具有多样、复杂的性别决定机制，鱼类的性别决定分为遗传性别决定（Genetic sex determination, GSD）和环境性别决定（Eenvironmental sexdetermination, ESD），GSD主要是通过异型性染色体进行判断，如雄性异型配子XX/XY型和雌性异型配子ZW/ZZ型。然而，绝大多数的鱼类的性染色体还不能通过目前的细胞遗传学分析进行鉴定。因此，研究者通过开发性别特异分子标记鉴定鱼类遗传性别，目前已获得超过30种鱼类的性别特异DNA标记，这些标记包括扩增片段长度多态性（Amplified FragmentLength Polymorphism，AFLP）、随机扩增多态性DNA（Random Amplification PolymorphismDNA，RAPD）、微卫星标记 (Simple Sequence Repeat，SSR)、单核苷酸多态性(SingleNucleotide Polymorphism，SNP)和苷酸序列的插入/缺失长度多态性（Insertion-deletion, InDel）等。

长吻鮠( Leiocassis longirostris)又名鮰鱼，属鲶形目(Siloriformes)、鲿科(Bagridae)、鮠属( Leiocassis)，因其吻部较一般鱼长，故名长吻鮠。长吻鮠肉质细嫩、口感爽滑、且肌间刺少、营养丰富，民间素有“不食江团，不知鱼味”之说，其鳔十分肥厚，干制成“鱼肚”是享誉中外的珍肴。长吻鮠是我国名贵淡水经济鱼类之一，多分布于我国长江干流、通江湖泊和各大支流的下流水域。长吻鮠具有显著的雌雄生长二态性，雄鱼生长速度显著快于雌鱼，进行全雄化养殖可以在不增加养殖量的前提下大幅度提高产量，开发其单性育种与单性养殖技术具有重要的产业意义。但在其性腺发育成熟之前，长吻鮠的雌鱼和雄鱼外部形态完全没有区别，无法用肉眼识别雌雄个体；通过细胞遗传学手段没有发现异型性染色体，也无法通过性染色体鉴定其遗传性别；这极大地限制了全雄化育种技术的发展。因此，急需开发一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记用于标记辅助育种。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速精准鉴定长吻鮠性别的分子标记，进而加快长吻鮠全雄化育种进程。

本发明的另一目的在于提供上述鉴定长吻鮠性别的检测方法。

本发明的又一目的在于提供上述鉴定长吻鮠性别的检测试剂盒。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记，其特征在于：所述分子标记为长吻鮠第7号染色体第1130404位碱基处的一段长32bp的插入/缺失的核苷酸序列，为SEQ ID NO.1所示，雌性个体具有SEQ ID NO.1序列，雄性个体缺失SEQ ID NO.1序列。

进一步的，用于检测上述分子标记的特异性引物为：前引物F1，核苷酸序列为SEQID NO.2所示，后引物R1，核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

上述一种利用分子标记鉴别长吻鮠遗传性别的检测方法，其特征在于：

（1）提取待测基因组DNA；