[发明专利]一种在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法

说明书

本发明公开了用于鲤EPC细胞转染的乳白蛋白载体，乳白蛋白载体为表面修饰有马来酰亚胺的α‑乳白蛋白球型颗粒。本发明还公开了乳白蛋白载体的制备方法，包括：将α‑乳白蛋白通过酶解后以超声重聚的方法使其成为球型颗粒；连接马来酰亚胺至α‑乳白蛋白颗粒表面使其形成乳白蛋白载体。本发明还公开了在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法，包括：将乳白蛋白载体和待转染质粒混合，并加入到EPC细胞培养基，形成转染培养基；利用转染培养基培养鲤鱼EPC细胞一段时间后，移除转染培养基，并更换回EPC细胞培养基继续培养。本发明对细胞毒性低、操作简便、转染效率高，可做为鱼类细胞的通用基因导入方法，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种用于细胞转染的乳白蛋白载体，还涉及一种用于细胞转染的乳白蛋白载体的制备方法，还涉及一种在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法，还涉及乳白蛋白载体的用途。

背景技术

鲤鱼上皮瘤细胞（Epithelioma papulosum cyprini, EPC）起源于鲤鱼表皮疱疹病毒感染引起的病变组织，目前已经衍生出80多株细胞系。其生长适应温度范围较广（15℃-33℃），且能在7℃-10℃的环境种存活数月。EPC细胞的生长特性使其成为研究鲤基因功能、细胞增殖、分化、凋亡的理想材料，也是其他淡水鱼类基因功能研究的重要材料。

细胞转染是研究和控制真核细胞基因功能的常规实验，在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。转染是将外源DNA片段导入真核细胞以获得新的生物学特性的方式，大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。(1)物理介导是通过物理方法将基因导入细胞，如电穿孔法和显微注射；(2)化学介导方法应用最广泛，如磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；(3)生物介导方法，有应用较早的原生质体转染，和现在比较多见的病毒介导的转染技术。

相比物理介导和生物介导方式，基于脂质体的转染方法因其优点，而应用最广泛。(1)物理介导转染方法需要专用设备，而脂质体的转染方法无需专用设备、操作简便、细胞致死率低；(2)病毒介导转染方法要求逆转录病毒的繁殖必须要有适当的包装细胞系，以利于产生高滴度的病毒，同时还具有适当的结构。病毒介导转染方法还需要构建载体、包装提纯病毒等步骤，因此周期长、步骤繁杂、成本高。而脂质体的转染方法无需上述步骤。

尽管鱼类细胞的生长模式和培养条件与哺乳动物细胞存在较大差异，但是考虑到脂质体转染方法的简便性，仍然应用脂质体转染方法于鱼类细胞上。但基于脂质体转染方法在鱼类中的应用仍然面临如下缺陷：(1)脂质体转染需要无血清环境以提高其转染效率，但无血清环境对鱼类细胞的毒性很高，容易造成细胞存活率低；(2)鱼类细胞培养环境温度较低，代谢较慢，脂质体转染效率较哺乳动物细胞要低。鉴于鱼类细胞在基因功能研究和经济性状遗传解析的重要性以及基于脂质体转染方法在鱼类中的应用所面临的问题，有必要发明一种简便高效转染鱼类细胞的方法，为鱼类基因功能研究提供更有力的工具。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供用于细胞转染的乳白蛋白载体。

本发明另有一个目的是提供一种用于细胞转染的乳白蛋白载体的制备方法。

本发明再有一个目的是提供一种在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法。

本发明还有一个目的是提供所述的乳白蛋白载体或依照所述的方法制备得到的乳白蛋白载体于遗传物质转染、制备转染用试剂盒和科学研究中的用途。

为此，本发明提供的技术方案为：

用于细胞转染的乳白蛋白载体，所述乳白蛋白载体为表面修饰有马来酰亚胺的α-乳白蛋白球型颗粒。

优选的是，所述的用于细胞转染的乳白蛋白载体中，所述乳白蛋白载体具有正电势。