[发明专利]一种在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法

权利要求书

1.在鲤EPC细胞中高效瞬时转染质粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.1)培养鲤鱼EPC细胞用于转染；

2.2)将乳白蛋白载体和待转染质粒以质量比1000:1混合，之后将吸附待转染质粒的乳白蛋白载体加入到EPC细胞培养基，形成转染培养基，所述乳白蛋白载体在所述转染培养基中的终浓度为125ng/μL，所述乳白蛋白载体为表面修饰有马来酰亚胺的α-乳白蛋白球型颗粒、且具有正电势，其中，所述乳白蛋白载体的制备方法包括如下步骤：

1.1)将α-乳白蛋白粉末通过酶解后以超声重聚的方法使其成为球型颗粒：将α-乳白蛋白粉末溶解于PBS溶液中，加入地衣芽孢杆菌水解酶于50℃进行酶解30min，之后超声振荡约45s；

向经过超声振荡的蛋白中按照质量比4:1加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，活化蛋白表面羧基基团；

1.2)连接马来酰亚胺至球型的α-乳白蛋白颗粒中使其形成乳白蛋白载体；

2.3)利用转染培养基培养鲤鱼EPC细胞12小时以上，移除转染培养基，并更换回EPC细胞培养基对转染后的鲤鱼EPC细胞继续培养。

2.乳白蛋白载体于鲤鱼EPC细胞中遗传物质转染和制备转染用试剂盒中作为介导材料的用途，其特征在于，所述乳白蛋白载体为表面修饰有马来酰亚胺的α-乳白蛋白球型颗粒、且具有正电势，

其中，所述乳白蛋白载体的制备方法包括如下步骤：

1.1)将α-乳白蛋白粉末通过酶解后以超声重聚的方法使其成为球型颗粒：将α-乳白蛋白粉末溶解于PBS溶液中，加入地衣芽孢杆菌水解酶于50℃进行酶解30min，之后超声振荡约45s；

向经过超声振荡的蛋白中按照质量比4:1加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，活化蛋白表面羧基基团；

1.2)连接马来酰亚胺至球型的α-乳白蛋白颗粒中使其形成乳白蛋白载体。