[发明专利]检测地中海贫血基因罕见突变的试剂、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了检测地中海贫血罕见基因突变的试剂、方法和试剂盒，所述试剂包括特异性扩增α地中海贫血和β地中海贫血罕见基因突变的正、反向引物、内参引物和测序引物；结合Sanger测序技术，快速准确地检测地中海贫血罕见基因突变，有利于明确患者基因型，在地中海贫血高发区有助于降低罕见致病突变的漏检率和减少重症患儿的出生。

技术领域

本发明属基因检测技术领域，特别涉及检测地中海贫血基因罕见突变的试剂、方法和试剂盒，采用普通PCR结合Sanger测序技术，对α及β地中海贫血中的罕见型基因突变进行检测。

背景技术

地中海贫血(简称地贫)是由于遗传基因缺失或突变所致的慢性溶血性贫血，一般可以分为α与β地贫两大类，是人类最常见的遗传病之一，广泛流行于地中海流域、中东、东南亚和非洲。我国的广西、广东、海南、贵州、云南、四川等省是地贫高发区。α地贫是由编码α珠蛋白链的基因突变导致的地贫，分为缺失型和非缺失型(主要是点突变)两类，编码α珠蛋白链的基因位于16号染色体短臂末端(16p 13.3-pter)的α珠蛋白基因簇中。目前全球至少发现35种缺失型和50多种非缺失型α地贫。β地贫是由于β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白链合成不足(β⁺)或缺失(β⁰)而引起的遗传性溶血性血红蛋白病，编码β珠蛋白基因位于11号染色体11p15.5上的β珠蛋白基因簇中。目前全球己报道了至少200多种基因突变类型，其中占绝大多数的点突变就占190多种，缺失型有17种。

全球大约有5％的人口为地贫基因突变的携带者，目前主流的地贫基因突变检测试剂盒的范围已能覆盖中国南方人群α、β地贫基因突变的主要类型。然而，地贫的分子基础复杂、突变类型繁多，在研究及临床工作中罕见及未知类型时有发现。地贫的预防和控制已成为我国卫生系统的重点工作。目前的常规地中海贫血检测试剂盒往往会造成罕见突变的漏检,因此在临床检验中,应严格遵循血液学表型与基因型相结合的原则,当血液学表型与地中海贫血基因型不相符合时,应该考虑珠蛋白基因测序的方法,以明确是否存在罕见或新发的地中海贫血突变类型,避免漏诊。虽然罕见地贫基因型在人群中所占的比例不高，但开展罕见地贫突变的检测研究仍然很有必要。

目前国内外β地贫分子诊断方法主要有等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交(PCR-ASO)、反向点杂交(RDB)、导流杂交和二代测序等。PCR-ASO技术操作繁琐，通量低和结果准确性受人为影响大，RDB技术操作繁琐，通量低、费用较高以及结果准确性受人为影响大；导流杂交技术不能做到基因位点的准确分型；Sanger测序方法成熟可靠，可检出样本中所有已知的突变和未知类型突变，因此，本发明采用PCR扩增结合Sanger测序方法对α与β地中海贫血中的罕见基因突变进行检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测地中海贫血基因罕见突变的试剂和检测方法，采用普通PCR结合Sanger测序技术，可快速准确的检测患者体内海贫血基因罕见突变，为地中海贫血的诊断及遗传咨询提供参考。

为了实现上述发明目的，本发明提供了检测地中海贫血基因罕见突变的试剂，所述试剂包括(1)～(3)中的至少一种：

(1)针对α地中海贫血相关基因HBA1和HBA2全序列的第一对引物；

(2)针对β地中海贫血相关基因HBB第1、2外显子和部分内含子的第二对引物；

(3)针对β地中海贫血相关基因HBB第3外显子和部分内含子的第三对引物；其中，所述第一对引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；所述第二对引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；

所述第三对引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。

进一步地，还包括测序引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。