[发明专利]一种量子点荧光编码聚乳酸微球及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种量子点荧光编码聚乳酸微球及其制备方法和应用，并基于此构建了液相悬浮生物芯片体系，通过试纸条免疫分析快速判断生物活性，最后应用于肿瘤标志物的免疫检测。该体系以新型聚乳酸荧光微球为载体，以水相CdTe QDs为信号物的三明治夹心型免疫传感器。该免疫检测体系包括新型聚乳酸荧光微球包被的肿瘤标志物捕获抗体、水相CdTe QDs标记的肿瘤标记抗体、以及通过抗原‑抗体间相互作用与两者分别相连的肿瘤标志物抗原。本发明具有反应快速、重复性好以及操作简便、高通量、多指标联合检测、高敏感性检测肿瘤标志物的特点。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，尤其涉及一种量子点荧光编码聚乳酸微球及其制备方法和应用，以及其在肿瘤标记物免疫检测上的应用。

背景技术

液相悬浮式生物芯片技术是以悬浮微球作为液相反应的载体，以快速高通量的流式细胞术作为分析手段进行快速高通量的多元检测。聚合物荧光编码微球作为液相悬浮生物芯片技术的核心，聚合物的选取直接决定所构建的生物悬浮芯片体系是否能有高效的检测性能。目前，所用的聚合物大多都是聚苯乙烯、聚苯乙烯-马来酸酐等难以降解的高分子聚合物。虽然其在免疫检测可以有效进行，但难以更加长远，以及在以后的体内检测受限。与这些聚合物不同，聚乳酸具有良好的生物相容性、光泽度、透明性、手感和耐热性。

聚合物荧光微球制备方法有溶胀法、层层自组装法、聚合法和乳化法、微通道辅助乳化法、溶胶-凝胶法等方法，大都具有一定的局限性。相较于他们，SPG膜乳化-溶剂挥发法具有产率高、重复性好、制备简单、粒径均一分散等众多优点。但目前利用聚乳酸制备微球的工艺有许多不足，如稳定性差、微球活性差、难以快速制备、聚乳酸微球的应用少等众多问题。

发明内容

发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种聚乳酸荧光微球及其制备方法和应用，并用免疫层析试纸条进行新型聚合物荧光微球的生物活性检测，再用于高灵敏度检测肿瘤标记物CA125、CA199、CA724、CEA，能够检测肿瘤标记物的最低检测限低至0.132ng/mL。

技术方案：本发明提供了一种量子点荧光编码聚乳酸微球，所述量子点荧光编码聚乳酸微球先通过马来酸酐、过氧化苯甲酰对聚乳酸进行接枝改性反应制得聚乳酸-马来酸酐聚合物，然后通过SPG膜乳化法制备即得。

其中，所述SPG膜乳化法具体包括如下步骤：将制备的聚乳酸-马来酸酐聚合物溶解于三氯甲烷中，再加入油性ZnS/CdSe QDs，超声分散均匀，制成分散相溶液，与分散相溶液互不相溶的溶液作为连续相溶液；将分散相溶液、连续相溶液转移至SPG膜乳化器中，调节SPG膜乳化器的磁力搅拌器转速使连续相溶液通过SPG膜乳化器膜孔流动，调节外加氮气压力，气压稳定后将分散相溶液通过SPG膜孔压入到连续相溶液中，得到粒径均一的微乳液滴；微乳液滴经过固化、溶剂挥发制得新型聚乳酸荧光微球。

其中，所述油性ZnS/CdSe QDs波长为510-530nm；SPG膜膜孔直径为5.1μm；所述磁力搅拌器的转速为300-400rpm；所述外加氮气的压力为0.008-0.012MPa；所述氮气气压的稳定时间为0-2min，所述微乳液滴类型为水包油型O/W；所述溶剂挥发固化时间是10-12h。

本发明内容还包括所述的量子点荧光编码聚乳酸微球的制备方法，包括以下步骤：

1)聚乳酸-马来酸酐聚合物的制备；

2)量子点荧光编码聚乳酸微球的制备。

其中，步骤1)中聚乳酸-马来酸酐聚合物的制备步骤如下：将聚乳酸、马来酸酐、过氧化苯甲酰溶解于二氯甲烷中得到溶液，再将溶液干燥得到白色固体混合物；后将干燥所得的白色固体混合物在烘箱中反应，反应结束后得到淡黄色固体混合物；通过用三氯甲烷溶解产物与乙醚沉淀多次进行纯化，离心，最后将固体混合物真空干燥即得。

本发明内容还包括一种荧光免疫分析试纸，所述荧光免疫分析试纸包括权利要求1所述的量子点荧光编码聚乳酸微球。