[发明专利]用于检测HLA-B*15：02等位基因的引物组及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于检测HLA‑B*15：02等位基因的引物组及其应用。本发明的用于检测HLA‑B*15：02等位基因的引物组，包括引物组A和引物组B，引物A的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示，引物组B的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.13所示。本发明针对HLA‑B*15:02基因的两个外显子设计了LAMP反应引物，LAMP反应中有4条特异性引物，对靶基因上6个区域进行识别，保证了LAMP反应的高度扩增性和特异性，特异性达100％。同时，设计两条环引物，将LAMP扩增时间大幅度降低，控制在20分钟左右。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于检测HLA-B*15：02等位基因的引物组及其应用。

背景技术

癫痫是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病，是一种主要的全球性疾病，尤其在资源匮乏和收入低的亚洲国家，癫痫患病率较高。

近年来在治疗癫痫和外周神经痛等方面广泛应用卡马西平，其具有价格低、疗效好的特点。但是研究发现，部分抗癫痫药物会引起超敏反应，例如，服用马卡西平引起的不良反应包括严重的皮肤病-Steven-Johnson综合征(SJS)和中毒性表皮坏死松解症(TEN)。SJS/TEN的发病率从药物暴露的千分之一到万分之一不等，死亡率高达35％。药物遗传学研究已经发现了抗癫痫药物诱导的不良反应与HLA-B*15:02等位基因之间存在很强的关联性，且HLA-B*15:02等位基因主要见于亚洲人群。作为预防措施，美国食品和药物管理局(FDA)强制要求对高危人群用药前进行等位基因的筛查。

HLA-B*15:02等位基因的常规检测方法主要为PCR扩增荧光检测法，其具有准确度高的特点，但需要昂贵的实验室设备、熟练的实验室人员，且必须在实验室中完成。此外，PCR扩增前，提取DNA是必需的步骤。在临床检测中，HLA检测从样本收集、运输到检测和向临床医生报告结果，有很长的周转时间(几天至一周)，影响了有效的治疗策略，尤其对癫痫发作期间或癫痫发作后的快速给药构成了障碍，以上原因极大限制了卡马西平在普通医疗机构的大面积推广。

虽然目前LAMP等温扩增技术在生物安全行业也使用广泛，尤其用于快速筛查方面，但因为假阳性高，在灵敏度和特异性方面无法做到和PCR一样高的精度，所以目前在医学检测行业没有广泛使用。

为了克服这些障碍，需要一种快速、准确、便携式、操作简便的针对HLA-B*15:02基因的体外快速检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测HLA-B*15：02等位基因的引物组。

本发明的再一目的在于提供上述引物组的应用。

本发明的再一目的在于提供含有上述引物探针组的试剂盒。

本发明的再一目的在于提供检测个体中HLA-B*15：02分型的方法。

根据本发明具体实施方式的检测个体中HLA-B*15：02等位基因的引物组，包括引物组A和引物组B，

针对HLA-B*15:02基因的两个外显子，外显子2和外显子3，分别设计了LAMP反应引物探针组A和引物探针组B，LAMP反应中有4条特异性引物(包括正向和后外引物(F3和B3)，正向和后内引物(FIP和BIP)，以及环状引物(FL和BL))，对靶基因上6个区域进行识别，保证了LAMP反应的高度扩增性和特异性，

其中，引物组A的引物的核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.1:5’-TGAGGTTCGACAGCGACG-3’,

SEQ ID NO.2:5’-TCACCGGCCTCGCTCT-3’,