[发明专利]一种蔗糖磷酸化酶的应用及利用其制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法

权利要求书

1.一种蔗糖磷酸化酶的应用，其特征在于：基因编码如序列1所述的蔗糖磷酸化酶在水或水溶液中催化蔗糖、甘油制备生成2-α-甘油葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述的蔗糖磷酸化酶的应用，其特征在于：所述蔗糖磷酸化酶为游离酶或固定化酶；所述固定化酶的制备方法为：通过基因工程手段将所述序列1导入大肠杆菌表达得到游离酶，用CS-TPP@NF载体固定所述游离酶，得到固定化酶，记作CS-TPP@NF@SPase。

3.一种生物催化制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：1）通过基因工程手段将序列1导入大肠杆菌表达得到蔗糖磷酸化酶，将表达蔗糖磷酸化酶的大肠杆菌细胞用高压匀浆法破碎，得到含有蔗糖磷酸化酶的粗酶液；2）利用步骤1）得到的粗酶液在水中催化蔗糖、甘油生成2-α-甘油葡萄糖苷。

4.根据权利要求3所述的生物催化制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤1）中所述粗酶液中蔗糖磷酸化酶的浓度为1mg/mL~6mg/mL。

5.根据权利要求3所述的生物催化制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤2）的具体操作为：称量蔗糖、甘油溶解于去离子水中，形成混合溶液，加入粗酶液，使混合溶液中蔗糖磷酸化酶的浓度为0.5~1.5mg/mL；摇床催化反应后，加热灭活酶；催化反应的温度为30℃~ 50℃，时间为24h~ 48h，pH值为6~8；蔗糖在去离子水中的浓度为0.3~1.5M、 甘油在去离子水中的浓1.8~2.4M。

6.一种生物催化制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：Ⅰ、通过基因工程手段将序列1导入大肠杆菌表达得到游离酶，用CS-TPP@NF载体固定所述游离酶，得到固定化酶，记作CS-TPP@NF@SPase； Ⅱ、利用步骤Ⅰ得到的固定化酶在水中催化蔗糖、甘油生成2-α-甘油葡萄糖苷。

7.根据权利要求6所述的生物催化制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤Ⅰ中，固定化过程：将壳聚糖和三聚磷酸钠在水溶液中常温下反应5~20min后，加入游离酶和氯化钙反应5~20min，离心收集沉淀即为固定化酶CS-TPP@NF@SPase；反应液中壳聚糖的浓度为 1mg/mL-5mg/mL, 三聚磷酸钠的浓度为100mg/mL-150mg/mL, 氯化钙的浓度为10mg/mL-50mg/mL；固定化温度为20℃~30℃，固定时间10min~30min，固定环境为金属浴振荡800rpm~1000rpm；所述常温为20℃~30℃。

8.根据权利要求6所述的生物催化制备2-α-甘油葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤Ⅱ的具体操作为：称量蔗糖、甘油溶解于去离子水中，加入吸去上清磷酸盐缓冲液的固定化酶CS-TPP@NF@SPase，摇床催化反应后，加热灭活酶结束反应；蔗糖在去离子水中的浓度为0.3~1.5M、 甘油在去离子水中的浓度1.8~2.4M；步骤Ⅱ催化反应的温度为30℃~40℃，时间为24h~48h，pH值为6~9；反应液中固定化酶CS-TPP@NF@SPase的浓度为0.5~1.5mg/mL。