[发明专利]电化学法检测尿液总胆汁酸试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒及其应用。所采用的电化学法检测尿液中的总胆汁酸试剂盒包含试剂：磷酸盐缓冲溶液、3α‑羟基类固醇脱氢酶(3α‑HSD)、氧化型辅酶Ⅰ(NAD⁺)、三联吡啶钌(Ru(bpy)₃²⁺)和丝网印刷电极。所述电化学法检测尿液总胆汁酸试剂盒采用丝网印刷电极结合I‑t曲线，根据电化学响应信号与待测物浓度的对数呈线性的关系，实现尿液中总胆汁酸的快速定量检测。所述电化学检测试剂盒简便快速，具有较好的重复性、稳定性和准确性，能实现尿液中总胆汁酸含量的快速定量检测，为无创实时监测肝胆疾病提供一种新选择。

技术领域

本发明属于电化学检测领域，主要涉及一种电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒及其应用。

背景技术

胆汁酸是一类24碳胆烷酸，以胆固醇为原料、在肝脏中合成。胆汁酸具有重要的生理功能，不仅能促进脂肪的消化、吸收，还可以作为信号分子激活多种受体，介导多种信号调节通路，在人体的葡萄糖、脂肪、自身代谢及能量代谢中发挥重要作用。肝脏疾病时肝细胞受损可引起胆汁酸合成及排泄障碍，胆汁酸的合成明显减少。肝细胞摄取胆汁酸功能障碍，使胆汁酸从血中的清除速率减慢，导致血液和尿液中的胆汁酸含量增高。血清胆汁酸是临床生化常规检测项目，其浓度变化可敏感地反映肝脏功能。研究表明尿液胆汁酸与血清胆汁酸水平有较强的相关性。由于尿液标本无需有创操作即可获得，因此，尿液胆汁酸可以代替血清胆汁酸作为无创、实时监测肝胆疾病的指标。

目前，临床主要通过酶循环法测定总胆汁酸，其原理是胆汁酸在3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)和Thio-NAD⁺作用下生成3α-酮类固醇及Thio-NADH。新生成的3α-酮类固醇在3α-HSD及NADH的作用下生成胆汁酸及NAD⁺。这样，微量胆汁酸检测信号在多次酶循环过程中被放大，同时使生成的Thio-NADH扩增，通过测定Thio-NADH的吸光度值变化可求得胆汁酸含量。该方法在临床应用较广泛，但其检测灵敏度在μmol/L级，尚有待提高，且用于检测的专用仪器价格昂贵、体积较大。

电化学分析法是根据待测物在溶液中的电化学性质，通过电流、电位和电阻等参数与待测物浓度之间的关系，对待测物实现定性和定量分析。用电化学法测定尿液总胆汁酸具有如下优点：操作简便、可移动性强、检测速度快、试剂盒样品用量少、灵敏度高、选择性好等。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种灵敏度高、使用方便的尿液总胆汁酸检测试剂盒及其应用。

本发明的电化学法检测尿液总胆汁酸试剂盒的原理为：在丝网印刷碳电极(SPCE)的工作电极表面加入含有3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)、氧化型辅酶Ⅰ(NAD⁺)和三联吡啶钌(Ru(bpy)₃²⁺)的磷酸盐缓冲液。再施加一定的氧化恒电位，溶液中的Ru(bpy)₃²⁺在电极表面被氧化为Ru(bpy)₃³⁺，待基线稳定后加入待测尿液样本，3α-HSD特异性催化尿液中的胆汁酸生成3α-酮类固醇和NADH。NADH在电极表面失去电子被氧化生成NAD⁺，同时Ru(bpy)₃³⁺被还原成Ru(bpy)₃²⁺。一定电位条件下，Ru(bpy)₃²⁺在电极表面再次被氧化为Ru(bpy)₃³⁺，从而产生电化学信号，故能在I-t曲线上对尿液中总胆汁酸含量进行间接电化学定量分析。