[发明专利]电化学法检测尿液总胆汁酸试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒，其特征在于：包括3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)、氧化型辅酶Ⅰ(NAD⁺)、三联吡啶钌(Ru(bpy)₃²⁺)、磷酸盐缓冲液和丝网印刷电极(SPCE)。

2.根据权利要求1所述的电化学检测尿液总胆汁酸试剂盒，其中，所述丝网印刷电极包括——印制电极的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)基片、PET基片上印制的外部绝缘层和基片上一端的导线接口，其特征在于所述的基片上还印制有三个电极，分别为碳工作电极、Ag/AgCl参比电极和碳对电极，三个电极形成一圆形工作区域，各电极通过绝缘膜下印制的导线与接口相连。

3.根据权利要求1所述的电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒，其中，所述3α-HSD的活度为10kU/L。

4.根据权利要求1所述的电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒，其中，所述NAD⁺的浓度为100.0mmol/L。

5.根据权利要求1所述的电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒，其中，所述Ru(bpy)₃²⁺的浓度为100.0mmol/L。

6.根据权利要求1所述的电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒，其中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为100.0mmol/L，pH值为8.5。

7.根据权利要求6所述的电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒，其中，所述磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer saline，PBS)由100.0mmol/L磷酸氢二钠溶液和100.0mmol/L磷酸钠溶液混合而配制。

8.一种如权利要求1-6所述电化学法检测尿液总胆汁酸的试剂盒的应用，其特征在于，包括如下具体步骤：

1)尿液样品预处理：分别取10μL尿液和990μL超纯水加入1.5mL E_P管中涡旋混匀，得到一次稀释的尿液样品；再分别取一次稀释的尿液样品10μL和990μL超纯水加入1.5mL E_P管中涡旋混匀，得到二次稀释的尿液样品；

2)分别取8μL 100.0mmol/L NAD⁺，12μL 10.0kU/L 3α-HSD，7μL 100.0mmol/LRu(bpy)₃²⁺，23μL超纯水和50μL浓度为100.0mmol/L的PBS溶液，pH值为8.5，加入1.5mL E_P管中涡旋混匀，得到检测混合液；

3)取步骤2得到的混合液50μL滴加在SPCE的工作区域，所述SPCE与电化学工作站相连，在1.20V恒电位下进行电流-时间曲线分析，至基线恒定时加入步骤1)得到的5μL 10⁴倍稀释的尿液样品于所述工作电极表面，计算I-t曲线中的峰电流，其氧化峰电流与尿液胆汁酸浓度的对数在一定范围内呈线性关系，从而对待测尿液样品中的总胆汁酸含量进行间接定量测定。