[发明专利]马链球菌马亚种8种蛋白的重组融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种马链球菌马亚种8种蛋白的重组融合蛋白及其制备方法和应用。所述的重组融合蛋白是由马链球菌马亚种的cne、eag、SclC、SclI、SclF、eq5、eq8和ideE 8种蛋白依次以蛋白接头Gly‑Gly‑Gly连接后得到。其中，优选的，所述的重组融合蛋白命名为SE8，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。实验证明，本发明制备的重组融合蛋白SE8具有良好的抗原性和免疫原性，免疫小鼠能够有效诱导机体产生高水平的特异性抗体，并对S.equi感染小鼠起到保护作用。此外，该重组融合蛋白是通过大肠杆菌纯化制得的菌体蛋白，不含其它成分，具有较高的安全性，避免了感染发病的现象。

技术领域

本发明涉及一种重组融合蛋白及其制备方法和应用，特别涉及由马链球菌马亚种8种蛋白构成的重组融合蛋白及其制备方法和在作为亚单位疫苗预防马链球菌马亚种中的应用。本发明属于兽药技术领域。

背景技术

马腺疫是马、驴常见传染病，是我国规定的三类动物疫病，该病的病原体为马链球菌马亚种。目前有国外多家公司生产的无细胞菌苗正在投入使用，包括Strepvax II(德国勃林格殷格翰公司生产)、Equivac S(新西兰Zoetis公司生产)、Strepguard(MSDAnimalHealth公司生产)等。这些疫苗通过肌肉免疫，但目前这类疫苗的有效性仍不能确定。

seM蛋白是马链球菌马亚种的一个重要的毒力蛋白(G B A,R S C,MICHAELA K,etal.2009a.Factors associated with likelihood of horses having a high serumStreptococcus equi SeM-specific antibody titer.Journal of the AmericanVeterinary Medical Association[J],235.)，因此很多疫苗研究都从该蛋白入手，一项seM提取物疫苗的研究结果显示，三次免疫后第二周攻毒，免疫组的发病率只有29％，对照组的发病率达到71％，三次免疫后第6周攻毒，免疫组的发病率为53％，对照组的发病率为48％，该结果说明这种针对seM蛋白的疫苗并不能提供很高的免疫保护力(M H A,R S H,FP J,et al.1991.Field evaluation of a commercial M-protein vaccine againstStreptococcus equi infection in foals.American journal ofveterinary research[J],52.)。

根据之前的研究结果，灭活疫苗并不能为马匹提供很好的免疫保护力，因此弱毒疫苗的研究逐渐开始。EquilisStrepE是由MSD Animal Health公司生产的弱毒疫苗，目前主要在欧洲使用，该弱毒疫苗是由1990年荷兰某分离株制得，该毒株缺失aroA(CHARLOTTEK,MAXINE B,CARL R,et al.2006.Sequence variation ofthe SeM geneofStreptococcus equi allows discrimination ofthe source of stranglesoutbreaks.Journal of clinical microbiology[J],44.)经过免疫实验，结果表明EquilisStrepE弱毒疫苗有一定的免疫保护效果，但同时有一定的不良反应，肌肉注射部位会出现肿胀。由于该疫苗株与野毒株具有相同的遗传物质，会造成临床检测的假阳性。因此，在临床上对于腺疫的确诊则需要其他的方法，增加了腺疫检测的难度。