[发明专利]从包含高度裂解细胞的发酵液中回收蛋白的方法

权利要求书

1.一种从细菌发酵液中回收感兴趣的蛋白的方法，其中所述发酵液中的细菌细胞表现为高度裂解，所述方法包括以下步骤：

a)以0.5至50g/L所述发酵液的量向包含所述感兴趣的蛋白的发酵液中添加至少一种絮凝剂；

b)通过过滤，优选通过终端过滤或者微孔过滤将所述感兴趣的蛋白与至少所述细菌细胞分离；和

c)从而在滤液中获得所述感兴趣的蛋白；

其中所述细菌细胞是芽胞杆菌细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种絮凝剂是阳离子剂、阴离子剂和/或非离子剂，优选选自有机聚合物和化学絮凝剂，所述有机聚合物包括阳离子、阴离子和/或非离子聚丙烯酰胺，聚乙烯亚胺(PEI)，聚(二烯丙基二甲基氯化铵)(pDADMAC)，聚胺，来自微生物的天然聚合物，所述化学絮凝剂包括可溶性铁或铝化合物。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中裂解程度可以使用600nm的光密度量度(OD₆₀₀)；剪切黏度测定；扫描电子显微术(SEM)例如用以测定完整细胞的数量；DNA定量；在线电容传感器；HPLC定量细胞内组分；流式细胞术；和/或细胞毒性实验来测量。

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中所述发酵液中细菌细胞的高度裂解对应于特征为以下的裂解程度：(i)当发酵后发生裂解时，在发酵后24小时和48小时后取样的样品的连续两次测量之间，所述发酵液的OD₆₀₀值降低，优选地，所述发酵液OD₆₀₀值降低至少10％，和/或(ii)当在发酵期间发生裂解时，与发酵开始时确定的粘度相比，所述发酵液的剪切粘度增加，优选地，剪切粘度增加20％以上。

5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在将所述感兴趣的蛋白与至少所述细菌细胞分离的步骤(b)之前添加二价阳离子。

6.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其中以范围为0.5至25g/L，优选1至15g/L所述发酵液的浓度添加所述至少一种絮凝剂。

7.根据权利要求1至6任一项所述的方法，其中所述感兴趣的蛋白是酶。

8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中所述感兴趣的蛋白选自淀粉酶、α–淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、支链淀粉酶、蛋白酶、金属蛋白酶、肽酶、脂肪酶、角质酶、酰基转移酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、葡糖苷酶、纤维二糖水解酶、木聚糖酶、木葡聚糖转移酶、木糖苷酶、甘露聚糖酶、植酸酶、磷酸酶、木糖异构酶、葡萄糖异构酶、乳糖酶、乙酰乳酸脱羧酶、果胶酶、果胶甲基酯酶、聚半乳糖醛酸酶、裂解酶、果胶裂解酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、半乳糖酶、漆酶、过氧化物酶和天冬酰胺酶。

9.根据权利要求1至8任一项所述的方法，其中步骤a)在b)之前实施。

10.根据权利要求1至9任一项所述的方法，其中步骤b)包括(i)使用Nutsche加压过滤器的过滤步骤或(ii)错流微孔过滤。

11.根据权利要求1至10任一项所述的方法，其中步骤b)(i)包括使用高孔隙率助滤剂，特别是珍珠岩助滤剂。

12.根据权利要求1至11任一项所述的方法，其中在步骤c)之前或者之后，可对所述感兴趣的蛋白进行进一步的下游处理步骤，所述下游处理步骤选自微孔过滤、超滤、透析过滤、透析-超滤、离子交换层析。

13.根据权利要求1至12任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在步骤a)和/或b)之前发酵所述细菌细胞。