[发明专利]改进的粒酶B变体在审

申请号：	202180044766.8	申请日：	2021-05-28
公开（公告）号：	CN115768897A	公开（公告）日：	2023-03-07
发明（设计）人：	小森靖则;井川智之;成田敦;石井慎也	申请（专利权）人：	中外制药株式会社
主分类号：	C12N15/57	分类号：	C12N15/57;A61P29/00;A61P35/00;A61P43/00;C12N5/10;A61K39/395;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/12;C12N15/63;A61K38/48;C12N9/64;A61K35/12
代理公司：	中科专利商标代理有限责任公司 11021	代理人：	柴云峰;张莹
地址：	日本国***	国省代码：	暂无信息
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摘要：
搜索关键词：	改进变体
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【说明书】：

本发明涉及具有增加的蛋白酶活性和/或增加的对抑制剂的抗性的粒酶B变体；编码粒酶B变体的多核苷酸；表达粒酶B变体的细胞；含有表达粒酶B变体的细胞的药物组合物；以及含有粒酶B变体的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物可以与表达嵌合受体和/或抗原结合分子的细胞组合使用。

技术领域

本发明涉及具有增加的蛋白酶活性和/或增加的对抑制剂的抗性的粒酶B变体；编码粒酶B变体的多核苷酸；表达粒酶B变体的细胞；包含表达粒酶B变体的细胞的药物组合物；以及包含粒酶B变体的药物组合物。

背景技术

粒酶是包括一组家族成员的蛋白酶。粒酶在T细胞和NK细胞(细胞毒性淋巴细胞)中表达，当这些细胞识别靶抗原时，粒酶会与穿孔蛋白等一起分泌到靶细胞(表达靶抗原的细胞)中，发挥细胞毒活性。转移到靶细胞后，粒酶切割各种底物，例如BID和胱天蛋白酶，最终激活参与靶细胞凋亡的信号转导系统，从而诱导靶细胞的细胞死亡(NPL 1)。

在粒酶家族中，粒酶A和粒酶B被认为对细胞毒活性有特别大的贡献。粒酶A通过形成二聚体发挥作用，而粒酶B作为单体发挥作用。因此，使用蛋白质工程很容易产生、表达和纯化粒酶B的变体，并且已经以药物发现为目的进行了研究和开发。例如，报道了多种变体，包括具有与其融合的肿瘤相关抗原结合的scFv的粒酶B(NPL2)。

另一方面，粒酶B作为抗肿瘤剂的使用是有限制的。其原因包括天然粒酶B的蛋白酶活性有限和通过在靶细胞中发展粒酶B的抑制剂而抑制粒酶B活性。NPL3表明PI-9，一种粒酶B活性的抑制剂，在肿瘤中高表达。此外，NPL 4表明，肝素(已知其在肿瘤中的产生增强)抑制粒酶B活性。即，在这些抑制剂高表达的肿瘤中，认为即使使粒酶B作用于这些肿瘤，也不能发挥充分的细胞毒活性，因此仅具有有限的抗肿瘤活性。

作为对这些抑制剂具有抗性的粒酶变体，PI-9抗性(PTL 1和NPL 5)和肝素抗性(NPL 6)粒酶B变体已在先前的研究中被报道。进而，报道了粒酶B变体(PTL 2)，其中对大鼠的粒酶B进行综合改造以切割VEGF和VEGF受体。

另一方面，当细胞毒性物质如粒酶用于治疗时，优选它们特异性地对靶细胞(例如肿瘤细胞)发挥细胞毒性作用。作为实现这一点的技术的一个例子，报告了一种方法，该方法使用转染了编码野生型粒酶等的基因和编码嵌合抗原受体(CAR)的基因的转基因细胞，使得细胞通过CAR与靶抗原的结合而活化，从而以增加的水平表达粒酶等(PTL 3)。

引用列表

专利文献

[PTL 1]US9528101B

[PTL 2]WO2005100556A2

[PTL 3]日本专利申请Kohyo公开号(JP-A)2019-526285(对应于非日本国际公开的未经审查的日本国家阶段公开)

[非专利文献]

[NPL 1]How Do Cytotoxic Lymphocytes Kill Cancer Cells？

Luis Martinez-Lostao,Alberto Anel and Julian Pardo

Clin Cancer Res.2015Nov 15；21(22):5047-56

[NPL 2]Delivery and therapeutic potential of human granzyme B

Kurschus FC1,Jenne DE.

Immunol Rev.2010May；235(1):159-71