[发明专利]用于验证流式细胞术测量的方法和系统

说明书

公开了用于表征基于荧光的分析仪器进行的测量的可信性和再现性的验证方法和系统。

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年4月21日提交的美国临时申请号63/013,098的优先权权益，将其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开文本涉及基于荧光的分析方法和系统，具体地涉及用于评价基于荧光的分析仪器进行的测量的可信性和再现性的验证方法。

背景技术

基于荧光的细胞分析系统(如流式细胞术和荧光激活细胞分选术(FACS))是测量测试样品中各种细胞元件(如细胞表面受体和细胞内组分)的强大工具。在FACS方法中，使用抗体缀合的荧光色素(荧光染料)对样品进行染色，从而发出诸如细胞受体或其他细胞标记物、肽和核酸的元件的存在和量的信号。多种不同荧光色素的开发允许一次同时使用多于一种荧光色素，其中每种荧光色素具有独特的、可识别的发射光谱。由于它们的组合能力和多功能性，因此流式细胞术和FACS通常用于整个药物开发过程，例如用于免疫分型、受体表达或占用以及其他功能测定。

虽然功能强大，但由于各种原因，流式细胞术和FACS方法通常比其他分析方法验证起来更具挑战性。这些原因包括缺乏方案标准化、缺乏标准化参考材料以及使用复杂且灵敏的仪器装置。通常用于染色的单克隆抗体和多克隆抗体不是标准化的，并且在质量和性能上可能变化很大。因此，研究人员有责任仔细评估所使用的试剂按预期工作。然而，对于执行给定方法和仪器的验证几乎没有给研究人员指导。根据例如US FDA，验证被简单地定义为对方法用于预期应用的适合性的评价，并且建议验证测试过程必须确保测定满足预定标准并且可靠地执行并且适合其预期用途。FDA指南承认，没有通用验证规则是恰当的，并且未提供用于验证测定的具体指南。缺少用于验证的标准或公认的监管指南和参考材料是一个挑战，令人遗憾地是文献没有很好地解决。当样品中目的靶细胞或标记物被认为以非常低的浓度存在时，方法验证的挑战甚至更大。需要改进的验证方法来验证基于荧光的分析方法和系统的性能。

发明内容

本公开文本的各个方面包括一种用于验证基于荧光的分析仪器对测试样品中染色的靶细胞群体的测量的方法，所述方法包括：(a)对包含表达靶细胞标记物的靶细胞的参考样品的第一部分中的细胞进行负染色或已经进行负染色；(b)对所述参考样品的第二部分中的所述靶细胞进行正染色或已经进行正染色；(c)使所述参考样品第一部分通过所述仪器以获得指示所述参考样品第一部分中的靶细胞浓度的荧光测量值，并且使所述参考样品第二部分通过所述仪器以获得指示所述参考样品第二部分中的靶细胞浓度的荧光测量值；(d)基于(c)中获得的所述荧光测量值，制备包含多个稀释样品的稀释系列，每个稀释样品具有标称浓度的所述靶细胞，每个标称细胞浓度大于由(a)中所述负染色的第一部分的荧光测量值指示的靶细胞浓度，其中每个稀释样品中的所述标称浓度不同于每个剩余稀释样品中的所述标称浓度；(e)使来自(d)的所述系列稀释样品通过所述仪器以获得一系列荧光测量值，所述系列荧光测量值包括每个稀释样品的荧光测量值；以及(f)对于每个稀释样品，比较来自(d)的所述标称细胞浓度和来自(e)的所述荧光测量值以定量在所述仪器中所述染色方法的性能。所述仪器可以是例如流式细胞仪。