[发明专利]用于验证流式细胞术测量的方法和系统

权利要求书

1.一种用于验证基于荧光的分析仪器对测试样品中染色的靶细胞群体的测量的方法，所述方法包括：

a.对包含表达靶细胞标记物的靶细胞的参考样品的第一部分中的细胞进行负染色或已经进行负染色；

b.对所述参考样品的第二部分中的所述靶细胞进行正染色或已经进行正染色；

c.使所述参考样品第一部分通过所述仪器以获得指示所述参考样品第一部分中的靶细胞浓度的荧光测量值，并且使所述参考样品第二部分通过所述仪器以获得指示所述参考样品第二部分中的靶细胞浓度的荧光测量值；

d.基于(c)中获得的所述荧光测量值，制备包含多个稀释样品的稀释系列，每个稀释样品具有标称浓度的所述靶细胞，每个标称细胞浓度大于由(a)中所述负染色的第一部分的荧光测量值指示的靶细胞浓度，其中每个稀释样品中的所述标称浓度不同于每个剩余稀释样品中的所述标称浓度；

e.使来自(d)的所述系列稀释样品通过所述仪器以获得一系列荧光测量值，所述系列荧光测量值包括每个稀释样品的荧光测量值；

f.对于每个稀释样品，比较来自(d)的所述标称细胞浓度和来自(e)的所述荧光测量值以定量在所述仪器中所述染色方法的性能。

2.根据权利要求1所述的方法，其中(f)中的比较包括对每个稀释样品的所述标称细胞浓度和所述荧光测量值之间的差异进行统计计算，以确定所述仪器和所述染色方法的线性、范围、准确度、精密度、检测限(LOD)和最低定量限(LLOQ)中的至少一个。

3.根据权利要求1所述的方法，其中(a)中对所述参考样品第一部分中的所述靶细胞进行负染色包括向所述参考样品第一部分中引入(i)荧光死细胞排除染料、(ii)缀合至荧光色素的非特异性抗体、和(iii)能够特异性结合所述靶细胞上的靶标记物的特异性抗体。

4.根据权利要求3所述的方法，其中(b)中对所述参考样品第二部分中的细胞中的所述靶细胞进行正染色包括向所述参考样品第二部分中引入(i)所述荧光死细胞排除染料、和(ii)缀合至权利要求3的荧光色素的权利要求3的特异性抗体。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述荧光死细胞排除染料选自核酸结合染料、碘化丙啶、DAPI、DRAQ7、7-AAD、TO-PRO-3和胺活性染料。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述荧光色素缀合的非特异性抗体包括缺乏特异性结合至细胞抗原的能力的抗体。

7.根据权利要求7所述的方法，其中所述荧光色素缀合的非特异性抗体包括缀合至所述荧光色素的IgD、IgG、IgA、IgM或IgE中的任一种。

8.根据权利要求3-8中任一项所述的方法，其中所述荧光色素选自别藻蓝蛋白(APC)、APC C750、APC AF700、亮紫(BV)421、BV510、hilite 7(H7)BV605、BV650、PE CF594、异硫氰酸荧光素(FITC)、R-藻红蛋白(PE或R-PE)、PE-Cy7(与菁染料Cy7偶联的PE)、APC-Cy7(与菁染料Cy7偶联的APC)、APC-H7(与Cy类似物Hilite 7(H7)偶联的APC)。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶细胞标记物选自作为T细胞标记物的CD3、作为B细胞标记物的CD19、作为红细胞标记物的CD235a、作为自然杀伤(NK)细胞标记物的CD56、作为单核细胞标记物的CD14以及作为粒细胞标记物的CD66b。

10.根据权利要求1所述的方法，其中(f)中的所述计算由与所述仪器耦合的处理器执行。

11.根据权利要求2所述的方法，其中确定LLOQ包括鉴定与用于精密度的预定标准和用于准确度的预定标准相关联的靶细胞浓度。