[发明专利]用于RNA合成的组合物和方法

权利要求书

1.一种产生RNA产物的方法，其包括以下步骤：

孵育体外转录混合物，从而产生包含多种单链RNA分子的RNA产物，其中所述体外转录混合物包含：

(i)DNA模板，其包含可操作地连接至靶序列的RNA聚合酶启动子序列；

(ii)至少一种RNA聚合酶，其识别所述RNA聚合酶启动子序列；

(iii)多种核糖核苷酸，其包括至少两种不同类型的核糖核苷酸，每种类型包含不同的核苷；以及

(iv)转录缓冲液，其包含渗透剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述渗透剂是或包括基于氨基酸的渗透剂、甲胺渗透剂、碳水化合物渗透剂或它们的组合。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述甲胺渗透剂是或包括甘油磷酰胆碱三甲胺N-氧化物或它们的组合。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述碳水化合物渗透剂是或包括山梨糖醇、甘油、肌醇、磷酸二甘油或它们的组合。

5.如权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述基于氨基酸的渗透剂是或包括基于脯氨酸的渗透剂、基于甘氨酸的渗透剂、基于依克多因的渗透剂、基于丙氨酸的渗透剂或它们的组合。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述基于丙氨酸的渗透剂是或包括β-丙氨酸。

7.如权利要求2至6中任一项所述的方法，其中所述基于氨基酸的渗透剂是或包括基于甘氨酸的渗透剂。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述基于甘氨酸的渗透剂是或包括甜菜碱。

9.如权利要求8所述的方法，其中甜菜碱以约0.5M至约10M、或约2M至约5M的浓度存在于所述体外转录混合物中。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述RNA聚合酶是或包括噬菌体RNA聚合酶。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述噬菌体RNA聚合酶是T7 RNA聚合酶、T3RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶、N4病毒颗粒RNA聚合酶或它们的变体。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中所述噬菌体RNA聚合酶是或包括T7 RNA聚合酶。

13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述孵育步骤发生在至少37℃的温度下。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述T7 RNA聚合酶是野生型T7 RNA聚合酶，并且所述孵育步骤发生在约45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃或更高的温度下。

15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述多种单链RNA分子是或包括向导RNA、短发夹RNA、siRNA、微RNA、长非编码RNA或信使RNA(mRNA)。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述多种单链RNA分子是或包括编码一种或多种靶多肽的mRNA分子。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述mRNA分子包含5'帽。

18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述多种单链RNA分子包含一种或多种核糖核苷酸，所述核糖核苷酸各自包含经修饰的核苷。

19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述RNA产物的免疫刺激性低于在约37℃的孵育温度下在不存在所述渗透剂的情况下产生的RNA产物。