[发明专利]表达针对牛中的bRSV的人类呼吸道合胞病毒蛋白的BCG免疫原性制剂的新用途

说明书

本发明涉及免疫原性制剂的新用途，该免疫原性制剂包含稳定在药学上可接受的盐水缓冲溶液中的浓度为10⁴‑10⁹个细菌之间的卡介菌(BCG)，其重组地表达人类呼吸道合胞病毒(hRSV，人正肺病毒)的至少一种蛋白质或免疫原性片段，以预防、治疗或减弱牛中的bRSV感染。

技术领域

提出了用于制备针对牛呼吸道合胞病毒(bRSV，牛正肺病毒(bovineorthopneumovirus))的疫苗的免疫原性制剂，其中该制剂包括至少一种减毒的分枝杆菌(Mycobacterium)菌株，优选卡介菌(Bacillus Calmette-Guérin，BCG)菌株，其重组地表达hRSV的一种或多种蛋白质或免疫原性片段。

背景技术

人类呼吸道合胞病毒(hRSV)感染是导致全球婴儿和5岁以下儿童中的下呼吸道急性感染的主要原因之一。尚不清楚哪种类型免疫应答对消除和防止hRSV感染最为有效。天然hRSV感染诱导Th1和Th2之间的混合应答，导致有害的肺部炎症，并且没有诱导持久的记忆应答。假定认为，针对hRSV诱导的更平衡的Th1型免疫应答将产生更好的疾病转归和持久的免疫记忆。

牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)卡介菌(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)是世界范围内施用的用于预防肺结核的M.bovis疫苗株。M.bovis BCG诱导有效和持续的Th1型免疫应答。它具有出色的安全性并且常规性地向婴儿和5岁以下儿童施用。本发明人开发了表达hRSV核衣壳的核蛋白(N)的BCG的重组株(rBCG-N-hRSV)，该重组株在WO2009/039178专利家族中受到保护。

用rBCG-N-hRSV的疫苗接种诱导针对hRSV的特异性细胞和体液免疫，保护小鼠免受与hRSV相关的肺损伤，并减少在攻击之后肺组织中的病毒载量。这是该种类开发的首款用于新生儿的疫苗，并且有可能保护婴儿免受hRSV感染和结核病两者。这种疫苗正处于批准用于人类尤其是新生儿的最后阶段。

另一方面，尽管在基因上与hRSV相关，并代表了幼牛(牛)发病的重要原因，但是牛RSV(bRSV)是一种不同于hRSV的病毒。犊牛的bRSV感染与人类新生儿的hRSV感染有许多相似之处，包括相似的年龄相关的易感性、季节周期性、宏观和微观病理以及先天和适应性免疫应答。新生犊牛由于它们的免疫系统不成熟，严重的bRSV感染的风险特别高，类似于在人类婴儿中的发生。

令人惊讶的是，本发明人发现针对hRSV开发的疫苗(rBCG-N-hRSV)保护新生犊牛对抗bRSV感染。

由于在两种病毒之间的差异，基于感染人类的病毒开发的疫苗能否为牛提供对抗bRSV的保护尚不明显或不可预测。正如我们稍后将详细说明的，本发明的疫苗是包含表达hRSV的至少一种蛋白质或免疫原性片段的浓度在每剂1x10⁴至1x10⁹菌落形成单位之间的卡介菌(BCG)菌株的制剂。

在现有技术中，已经开发了一些针对bRSV的疫苗，其与本发明中使用的疫苗不同，因为本发明的疫苗最初是为人类以及针对hRSV开发的。

例如，Zhang,Baoshan等人(Protection of calves by a prefusion-stabilizedbovine RSV F vaccine.npj Vaccines,2017,vol.2,no 7,p.1-11)，公开了使用bRSV F蛋白作为抗病毒成分的针对bRSV的疫苗。根据本发明人，他们依赖于为人类配制的带有hRSVF蛋白的疫苗，并组合使用基于结构的设计、抗原a表征和X射线晶体学来转化hRSV F在牛环境中的稳定。该公布公开了具有共价融合亚基的牛呼吸道合胞病毒的F蛋白的DS2稳定版本，消除了融合肽以及模拟通过突变实现的预融合构象。该蛋白在实验室中被针对融合前的bRSV F蛋白而获得的特异性抗体识别。结果表明，用DS2稳定的bRSV F免疫原可以在原生宿主中诱导针对RSV的高度保护性免疫，对犊牛的bRSV的预防有意义。