[发明专利]效价测定

说明书

一种评估MSC响应促炎性刺激产生抗炎细胞因子的效价的方法。该方法包括用一种或多种促炎性细胞因子(例如TNF‑α)刺激MSC一段时间，然后鉴别和量化抗炎细胞因子的产生。响应TNF‑α产生有效水平的抗炎细胞因子的MSC可以用于治疗衰老相关疾病状况，包括衰老衰弱和阿尔茨海默病，也可用于治疗冠状病毒感染。该方法表明，TNF‑α诱导的MSC稳健分泌多种抗炎细胞因子，包括IL‑1受体拮抗剂(IL‑1RA)、IL‑10和粒细胞集落刺激因子(G‑CSF)。

对相关申请的交叉引用

本申请要求2020年4月20日提交的美国临时专利申请第63/012,884号的优先权，其内容全部并入本文。

技术领域

本文提供用于评估人间充质干细胞响应暴露于诸如TNF-α等促炎性细胞因子产生抗炎细胞因子的效价的方法。人间充质干细胞能够产生足够的抗炎细胞因子，然后可以用于治疗涉及长期炎症的疾病，如衰老衰弱、阿尔茨海默病和冠状病毒感染。

背景技术

衰老衰弱给个体的整体健康和福祉带来了一个非常令人担忧的问题。衰老衰弱是一种老年综合征，其特征是虚弱、体力活动少、运动能力减慢、精疲力竭和体重无意中减轻。参见Yao,X.等人，Clinics in Geriatric Medicine27(1):79-87(2011)。此外，许多研究表明，衰老衰弱和炎症之间存在直接关联。参见Hubbard,R.E.等人，Biogerontology 11(5):635-641(2010)。

免疫衰老的特征是低度、慢性系统性炎症状态，称为发炎。参见Franceshi,C.等人，Annals of the New York Academy of Sciences 908:244-254(2000)。这种在衰老和衰老衰弱中发现的炎症状态或慢性炎症加剧，导致免疫失调和先天免疫和适应性免疫的复杂重塑。在免疫衰老中，T细胞和B细胞储库是偏态的，导致重新表达CD45ra(TEMRA)的CD8⁺T效应记忆细胞和CD19⁺晚期/衰竭记忆B细胞增加，且CD8⁺稚T细胞和切换记忆B细胞(CD27⁺)减少。参见Blomberg,B.B.等人，Immunologic Research 57(1-3):354-360(2013；Colonna-Romano,G.等人，Mechanisms of Ageing and Development130(10):681-690(2009)；和Koch S.等人，ImmunityAgeing:5:6(2008)。T细胞和B细胞储库的这种转变导致了不感受的免疫状态或低效的免疫状态。免疫系统的这种恶化导致更容易感染传染病，并降低对疫苗接种的反应。最佳的B细胞功能对于针对疫苗产生有效的抗体反应和防止感染源至关重要。众所周知，与衰老相关的系统性炎症(TNF-α、IL-6、IL-8、INFγ和CRP)增加诱导B细胞功能受损，导致抗体反应差和疫苗效价降低。

发炎已受到相当大的关注，因为它表明免疫变化与许多老年常见疾病和疾病状况(例如衰老衰弱)之间存在联系。循环炎症介质，例如细胞因子和急性期蛋白，是观察到随着衰老而增加的低度炎症的标记。这些促炎性细胞因子(例如TNF-α、IL-6)损害B细胞生成针对外源性抗原和疫苗的保护性抗体的能力。这种受损的B细胞反应是通过减少类别转换重组(class switch recombination,CSR)来测量的，CSR是免疫球蛋白将同种型从IgM转换为次级同种型(IgG、IgA或IgE)的能力。免疫球蛋白同种型转换对于正确的免疫反应至关重要，因为每个同种型的效应器功能不同。CSR和体细胞超变(somatic hypermutation,SHM)的关键参与者是由Aicda基因编码的酶，即激活诱导胞苷脱氨酶(activation-inducedcytidine deaminase,AID)。AID在CSR和SHM中的基本功能是，通过在免疫球蛋白的切换区和可变区将胞嘧啶转化为尿嘧啶来启动DNA断裂。