[发明专利]用于治疗酸性神经酰胺酶缺乏症的载体

说明书

本发明涉及一种包含ASAH1开放阅读框的载体，用于治疗酸性神经酰胺酶缺乏症。

技术领域

本发明涉及一种包含ASAH1开放阅读框的载体，用于治疗酸性神经酰胺酶缺乏症，如与进行性肌阵挛性癫痫相关的脊髓性肌萎缩症或法伯(Farber)病。

背景技术

酸性神经酰胺酶缺乏症是包括称为法伯病(FD)的罕见溶酶体贮积症和称为脊髓性肌萎缩症伴进行性肌阵挛性癫痫(SMA-PME)的罕见癫痫病在内的一系列疾病。FD和SMA-PME均是因酸性神经酰胺酶(ASAH1)基因中发生突变引起的，这导致酸性神经酰胺酶活性降低，进而导致神经酰胺积聚以及各种病理表现。FD是一种早发疾病，原因是酸性神经酰胺酶活性低于10％，而残余活性较高则是造成SMA-PME的原因，SMA-PME具有仅限于中枢神经系统(CNS)且始于下运动神经元病的晚发表型。FD始于皮下脂肪肉芽肿、关节痛和声音嘶哑。还观察到，神经和内脏受累分别导致精神运动性迟滞和肝脾肿大。大部分FD患者表现出生长发育障碍，且活不过2岁。包括骨髓在内的受影响的组织中通常存在由泡沫组织细胞和巨噬细胞构成的结节和炎症，这突出了造血系统在疾病中的潜在作用。此外，白细胞似乎主要是在法伯病中发生失调。SMA-PME在婴儿期临床表现为一种下运动神经元病，伴有肌肉无力、行走困难和震颤。癫痫伴肌阵挛发作通常在儿童晚期出现，随着病情演变还可能出现其他临床表现，如认知能力下降、脊柱侧弯和听力丧失。患者一般会在青少年时期因呼吸衰竭而死亡。

目前还没有治愈酸性神经酰胺酶缺乏症的方法(Yu等人，2018；Orphanet Journalor Rare Diseases；13：121)。因此，目前的治疗策略仅限于症状管理和支持治疗。造血干细胞移植(HSCT)显示出一些有希望的结果，在许多没有影响CNS的FD患者中，其活动性和疼痛均有实质性的改善。然而，在患有经典FD并伴有CNS并发症的患者中进行的HSCT并没有逆转神经表型，并且随着时间的推移，患者病情恶化。还提出了离体基因疗法，其中从患者或供体中分离出造血干细胞(HSC)，使用慢病毒载体通过基因矫正对其进行修饰，然后再移植至有需要的患者中。然而，由于在接受慢病毒载体/酸性神经酰胺酶转导的造血细胞的非人灵长类的大脑中未观察到显著变化，所以这种方法可能无法有效解决ASAH1缺乏症的神经表型(Walia等人，2011；Hum Gene Ther；22，第679–687页)。酶替代疗法(ERT)也在开发中，包括向有需要的患者注射重组酸性神经酰胺酶。然而，ERT策略在神经表型方面面临局限性，因为酶穿过血脑屏障的能力很差。

因此，仍然急需一种针对酸性神经酰胺酶缺乏症例如SMA-PME和法伯病的有效疗法。

发明内容

令人惊喜的是，本发明发现了包含ASAH1开放阅读框(ORF)的腺相关(AAV)载体是治疗FD和SMA-PME的高效基因治疗载体。特别地，在此证明，由于本发明，CNS和外周改变均得到了矫正。本发明是对目前开发的治疗方法的重大改进，因为迄今为止，还没有其他治疗方法能够矫正这两种改变。

在第一方面，本发明涉及一种重组AAV(rAAV)载体，包含ASAH1ORF。该载体可以用于治疗酸性神经酰胺酶缺乏症的方法中。特别地，所述rAAV载体可以用于治疗选自法伯病(FD)和与进行性肌阵挛性癫痫相关的脊髓肌萎缩症(SMA-PME)的疾病的方法中。在具体的实施方案中，所述AAV载体用于治疗囊性纤维化的方法中。在具体的实施方案中，所述载体是一种能够穿过血脑屏障的AAV载体。具有能穿过血脑屏障的能力的说明性AAV载体包括但不限于包含AAV9衣壳、AAV9P1衣壳、AAVpo1A1衣壳、AAV10衣壳例如AAVrh.10或AAVcy.10衣壳、AAVrh.39衣壳或进化枝F AAVHSC衣壳的载体。在进一步的实施方案中，所述AAV载体包含AAV9衣壳、AAV10衣壳例如AAVrh.10或AAVcy.10衣壳、AAVrh.39衣壳或进化枝F AAVHSC衣壳。在另一个实施方案中，所述AAV载体包含AAV9或AAV10衣壳。在又一个实施方案中，所述AAV载体包含AAV9衣壳。