[发明专利]用于RT-LAMP反应的扩增体系组合物、RNA病毒的RT-LAMP方法及应用有效
| 申请号： | 202111681728.1 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114277192B | 公开（公告）日： | 2022-11-18 |
| 发明（设计）人： | 刁含文 | 申请（专利权）人： | 南京巨匠生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 张金铭 |
| 地址： | 211100 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 rt lamp 反应 扩增 体系 组合 rna 病毒 方法 应用 | ||
1.氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的逆转录酶M-MLV在RNA病毒RT-LAMP反应中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述RNA病毒包括SARS-COV-2病毒。
3.用于RT-LAMP反应的扩增体系组合物，其特征在于，所述扩增体系组合物中的逆转录酶为氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的逆转录酶M-MLV。
4.根据权利要求3所述的扩增体系组合物，其特征在于，所述扩增体系组合物还包括DNA聚合酶、dNTP、保护剂和引物组。
5.根据权利要求4所述的扩增体系组合物，其特征在于，所述扩增体系组合物用于SARS-COV-2病毒的RT-LAMP反应，所述扩增体系组合物包括引物F3 50～500nmol，引物B350～500nmol，引物BIP 400～800nmol，引物FIP 400～800nmol，引物LB100～600nmol，引物LF 100～600nmol，MgSO41～50mmol，10×Bst-DNA聚合酶buffer 1～20μL，Bst-DNA聚合酶0.2～20U和逆转录酶M-MLV 5～200U。
6.根据权利要求5所述的扩增体系组合物，其特征在于，所述扩增体系组合物包括引物F3 200nmol，引物B3 200nmol，引物BIP 500nmol，引物FIP 500nmol，引物LB 600nmol，引物LF 600nmol，MgSO4 20mmol，10×Bst-DNA聚合酶buffer 10μL，Bst-DNA聚合酶8U和逆转录酶M-MLV200U。
7.RNA病毒的RT-LAMP方法，其特征在于，将权利要求3或4所述的组合物与RNA病毒样本混匀后，于60～65℃任一反应温度下恒温扩增。
8.根据权利要求7所述的RT-LAMP方法，其特征在于，所述RNA病毒包括SARS-COV-2病毒，所述RNA病毒的检出限为180copies/ml。
9.根据权利要求7或8所述的RT-LAMP方法，其特征在于，所述恒温扩增的设备选自实时荧光定量PCR仪或其他恒温反应装置。
10.权利要求3～6任一项所述组合物或权利要求7～9任一项所述RT-LAMP方法在RNA病毒富集、筛选或非诊断目的的检测中的应用。
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