[发明专利]一种应用于原代肿瘤细胞的靶基因编辑方法

权利要求书

1.一种用慢病毒侵染原代肿瘤细胞的方法，其包括：

将慢病毒加入到包含原代肿瘤细胞的液体基质中；

将所述慢病毒与所述原代肿瘤细胞共同培养；

其中将所述慢病毒加入到包含原代肿瘤细胞的液体基质中时，所述原代肿瘤细胞为非贴壁状态。

2.根据权利要求1所述的方法，其还包括：

在将所述慢病毒加入到包含原代肿瘤细胞的液体基质中之前，

利用饲养层细胞对原代肿瘤细胞进行扩增培养。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，

利用饲养层细胞对原代肿瘤细胞进行扩增培养之后，去除饲养层细胞以控制所述饲养层细胞占饲养层细胞和原代肿瘤细胞总数的比例在5％以下，优选在4％以下，进一步优选在3％以下，进一步优选在2％以下，进一步优选在1％以下。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中将所述慢病毒加入包含原代肿瘤细胞的液体基质时，所述慢病毒与所述原代肿瘤细胞的拷贝数比例为：每5x10⁵细胞5x10⁶～5x10⁷TU慢病毒，例如8x10⁶～3x10⁷TU，1x10⁷～2x10⁷TU。

5.一种原代肿瘤细胞基因编辑方法，其包括使用如权利要求1-4中任一项所述的方法用慢病毒侵染原代细胞，其中，所述慢病毒包装有Cas9蛋白编码序列及sgRNA编码序列。

6.一种使用如权利要求5中所述方法编辑的原代肿瘤细胞。

7.一种原代肿瘤细胞基因文库，其包含权利要求6中所述的原代肿瘤细胞。

8.一种使用如权利要求6所述的原代肿瘤细胞培养的类器官。

9.一种将如权利要求6所述的原代肿瘤细胞或如权利要求8所述的类器官用于疾病机理及治疗研究的用途。

10.一种使用如权利要求7所述的原代肿瘤细胞基因文库进行高通量筛选的方法，所述高通量筛选选自：功能基因筛选、药物靶点筛选、药物敏感基因筛选、及耐药基因筛选中的任一种。