[发明专利]基于CRISPR/Cas9技术构建Bcl6基因超级增强子敲除动物模型的方法及应用

权利要求书

1.基于CRISPR/Cas9技术构建Bcl6基因超级增强子(Bcl6-SE)敲除动物模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)靶向小鼠Bcl6-SE序列的gRNA设计：

根据Bcl6-SE序列设计一对相应的gRNA，所述gRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；

2)gRNA制备并显微注射获得F0小鼠：

将步骤1)中的一对gRNA进行纯化，并与cas9质粒共同注射小鼠胚胎，获得F0代小鼠；

3)鉴定Bcl6-SE基因型，筛选出阳性F0代小鼠；

4)阳性F0代小鼠与野生型小鼠杂交得到F1代小鼠，F1代杂合小鼠自交获得纯合后代，从而构建得到Bcl6-SE敲除的动物模型。

2.根据权利要求1所述构建Bcl6-SE敲除动物模型的方法，其特征在于，所述步骤3)用于Bcl6-SE基因型鉴定的引物包括公用上游引物和两条下游引物，所述上游引物序列如SEQID NO.3所示，所述下游引物序列如SEQ ID NO.4和EQ ID NO.5所示。

3.一种Bcl6-SE敲除的动物模型，其特征在于，由权利要求1或2所述方法构建得到。

4.权利要求3所述的动物模型可以T细胞发育过程中研究超级增强子对Bcl6Bcl6基因调控的机制。