[发明专利]适用于GPR15基因检测的引物探针组、方法及试剂盒

说明书

本发明公开了适用于GPR15基因检测的引物探针组、方法及试剂盒，其中引物探针组包括：针对GPR15：正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；反向引物核苷酸序列如SEQ ID No:2所示；探针核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；针对内参基因以SDHA、ACTB为例，优选SDHA作为内参：SDHA正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.4所示,反向引物核苷酸序列如SEQ ID No:5所示,探针核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；ACTB正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.7所示,反向引物核苷酸序列如SEQ ID No:8所示,探针核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。本发明的引物探针组，适用范围较广，既可用于细胞系样本，也适用于临床组织样本，特异性好，灵敏度高，检测精准，而且操作简单，可降低检测成本，节约检测时间。

技术领域

本发明是关于生物检测技术领域，特别是关于一种适用于胃肠组织和肿瘤的GPR15基因检测的引物探针组、方法及试剂盒。

背景技术

GPR15,G蛋白偶联受体15，是一种被广泛研究的孤儿G蛋白偶联受体。它是人类免疫缺陷病毒1型和2型的趋化因子共受体。相关报告已经证明了GPR15和免疫系统之间存在显著关联，GPR15被发现在记忆B细胞、浆母细胞和调节性T细胞亚群中表达。它引导T细胞归巢到发育中的表皮和结肠，并调节结肠炎。当GPR15控制FOXP3+调节性T细胞(tregs)归巢到大肠固有层时，它可以减轻结肠炎症。越来越多的证据表明，炎症可能帮助肿瘤细胞逃避来自免疫系统的防御。GPR15表达水平和表观遗传调控也对吸烟者的健康状况有显著影响。最近，GPR15被去孤儿化，其相应的天然配体显示出抑制癌细胞生长的能力。现有技术报道，GPR15在结肠腺癌和直肠腺癌中的表达明显低于正常组织。

现有的研究对GPR15在胃肠肿瘤中的作用，特别是非免疫的结直肠细胞和组织关注较少，缺乏针对GPR15特异性引物和探针检测方法。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于GPR15基因检测的引物探针组、方法及试剂盒，通过选择合适的引物探针组组合，在胃肠组织和肿瘤的适用范围较广，既可用于细胞系样本，也适用于临床组织样本，特异性好，灵敏度高，检测精准，而且操作简单，可降低检测成本，节约检测时间。

为实现上述目的，本发明的实施例提供了适用于GPR15基因检测的引物探针组，引物探针组包括：针对GPR15：正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；反向引物核苷酸序列如SEQ ID No:2所示；探针核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；针对SDHA：正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；反向引物核苷酸序列如SEQ ID No:5所示；探针核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示。针对ACTB:正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；反向引物核苷酸序列如SEQID No:8所示；探针核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

在本发明的一个或多个实施方式中，针对GPR15：所述探针核苷酸序列的5’端还标记有荧光报告基团，3’端还标记有荧光淬灭基团。

在本发明的一个或多个实施方式中，针对SDHA：所述所述探针核苷酸序列的5’端还标记有荧光报告基团，3’端还标记有荧光淬灭基团。

在本发明的一个或多个实施方式中，针对ACTB：所述所述探针核苷酸序列的5’端还标记有荧光报告基团，3’端还标记有荧光淬灭基团。

在本发明的一个或多个实施方式中，针对GPR15：所述探针核苷酸序列的荧光报告基团为FAM、HEX、VIC、ROX、Cy5中的至少一种，荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2、MGB中的至少一种。