[发明专利]适用于GPR15基因检测的引物探针组、方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202111666871.3 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114182020A | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 惠薇;戴文韬;卞振昌;刘佳;丁国徽 | 申请（专利权）人： | 苏州睿明医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 苏州三英知识产权代理有限公司 32412 | 代理人： | 席勇 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 适用于 gpr15 基因 检测 引物 探针 方法 试剂盒 | ||
1.一种适用于GPR15基因检测的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括：
针对GPR15：正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；反向引物核苷酸序列如SEQ IDNo:2所示；探针核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；
内参基因选自SDHA、ACTB：
针对SDHA：正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；反向引物核苷酸序列如SEQ IDNo:5所示；探针核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
针对ACTB：正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；反向引物核苷酸序列如SEQ IDNo:8所示；探针核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。
2.如权利要求1所述的适用于GPR15基因检测的引物探针组，其特征在于，针对GPR15：所述探针核苷酸序列的5’端还标记有荧光报告基团，3’端还标记有荧光淬灭基团。
3.如权利要求1所述的适用于GPR15基因检测的引物探针组，其特征在于，针对SDHA：所述所述探针核苷酸序列的5’端还标记有荧光报告基团，3’端还标记有荧光淬灭基团。
4.如权利要求2所述的适用于GPR15基因检测的引物探针组，其特征在于，针对GPR15：所述探针核苷酸序列的荧光报告基团为FAM、HEX、VIC、ROX、Cy5中的至少一种，荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2、MGB中的至少一种。
5.如权利要求3所述的适用于GPR15基因检测的引物探针组，其特征在于，针对SDHA：所述探针核苷酸序列的荧光报告基团为FAM、HEX、VIC、ROX、Cy5中的至少一种，荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2、MGB中的至少一种。
6.适用于GPR15基因检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
针对目标样本和对照样本，提取RNA，将所述RNA反转录成cDNA，所述目标样本选自结直肠细胞或目标组织，所述对照样本包括健康的细胞/组织；
形成PCR反应体系，所述PCR反应体系包括如权利要求1-7任一所述的引物探针组；
荧光PCR扩增反应；
结果判定。
7.如权利要求8所述的适用于GPR15基因检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系包括Premix Ex Taq(Probe qPCR)(2X)10μL、10μmol的正向引物0.4μL、10μmol的反向引物0.4μL、10μmol的probe 0.8μL、ROX Reference Dye II(50X)0.2μL、cDNA2μL、灭菌水6.2μL，总体积20μL。
8.如权利要求6所述的适用于GPR15基因检测的方法，其特征在于，所述荧光PCR扩增反应的条件为：95℃热激活30秒；
95℃变性5秒，60℃退火34秒，共进行40-50个循环。
9.如权利要求6所述的适用于GPR15基因检测的方法，其特征在于，所述目标样本源自结直肠癌组织或结直肠癌细胞系或原代细胞。
10.适用于GPR15基因检测的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-7任一所述的引物探针组。
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