[发明专利]蟋蟀CDA1和CDA2基因的dsRNA合成方法及其应用

权利要求书

1.一种蟋蟀CDA1和CDA2基因，其特征在于，所述CDA1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述CDA2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1所述蟋蟀CDA1和CDA2基因的获得方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)引物设计：利用clone manager各设计两对引物如下：

蟋蟀CDA1基因：第一对引物的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物序列如SEQID NO.6所示，第二对引物的上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列如SEQ IDNO.8所示；

蟋蟀CDA2基因：第一对引物的上游引物序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物序列如SEQID NO.10所示，第二对引物的上游引物序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物序列如SEQ IDNO.12所示；

(2)模板制备：参照TaKaRa Trizol试剂盒提取总RNA，然后反转录成cDNA，从而得到PCR扩增所需模板；

(3)PCR扩增：通过巢式PCR扩增获得目的基因，将目的基因与T载体连接，转入感受态细胞中，进行蓝白斑筛选，挑取白斑到LB液体培养基中，进行菌液PCR，有目的条带的菌液送测序。

3.权利要求1所述蟋蟀CDA1和CDA2基因合成的dsRNA。

4.权利要求3所述dsRNA的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)引物设计：CDA1合成dsRNA的引物序列如下：

上游引物序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物如SEQ ID NO.14所示；

CDA2合成dsRNA的引物序列如下：

上游引物序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物如SEQ ID NO.16所示；

(2)模板制备：采用步骤(1)设计的引物，以蟋蟀基因片段为模板进行PCR扩增，切胶回收即可得到所需模板；

(3)dsRNA合成：步骤(2)得到的模板依照T7RiboMAXTMExpressRNAi System(Promega)试剂盒体外转录合成dsRNA。

5.权利要求3所述dsRNA在害虫防治中的应用。