[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的荧光检测卡及其制备方法以及检测粮油中的黄曲霉毒素B1的方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B1的荧光检测卡，包括壳体和设置在壳体内部的底板，其特征在于，所述壳体包括互相扣合的上壳和下壳，所述底板表面依次设置有吸水材料、层析膜和样品结合垫；其中，层析膜表面依次设有质控线和检测线；上壳设有观察窗和加样孔；样品结合垫设置在加样孔的下方，质控线和检测线设置在观察窗的下方；其中，样品结合垫包埋有荧光微球标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联物，层析膜的质控线包被有黄曲霉毒素B1抗原，检测线包被有羊抗鼠抗体。

2.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1的荧光检测卡，其特征在于，所述样品结合垫为玻璃纤维和聚酯膜复合膜，在聚酯膜上包埋有所述荧光微球标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联物。

3.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1的荧光检测卡，其特征在于，所述荧光微球为镧系荧光微球。

4.权利要求1～3任一项所述的黄曲霉毒素B1的荧光检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)荧光微球与黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联，得到荧光微球标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联物；

2)将荧光微球标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联物用缓冲液稀释后，得到稀释液，将样品结合垫浸泡于稀释液中，取出后经真空冷冻干燥后待用；

3)将黄曲霉毒素B1抗原包被在层析膜的质控线内，将羊抗鼠抗体包被在检测线内，得到层析膜；

4)将吸水材料和步骤2)所得的样品结合垫分别搭接在步骤3)所得的层析膜的左右两端，得到搭接后的底板，再将底板与壳体进行组装，得到黄曲霉毒素B1的荧光检测卡。

5.如权利要求4所述的黄曲霉毒素B1的荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联物的制备方法包括以下步骤：

取荧光微球于离心管中，加入水混匀，并超声分散，得到荧光微球分散液；分别加入N-羟基琥珀酰亚胺溶液和碳二亚胺溶液，混合混匀后，离心，去掉上清液，再加入纯水，超声后，得到微球悬液，然后加入黄曲霉毒素B1单克隆抗体，反应后，再加入牛血清白蛋白，封闭反应后，离心，去除上清液，再加入复溶液，超声，得到得到荧光微球标记的黄曲霉毒素B1单克隆抗体偶联物，并冷藏备用。

6.如权利要求5所述的黄曲霉毒素B1的荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述荧光微球分散液中荧光微球与水的体积比为1：(9～10)；所述荧光微球分散液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液和碳二亚胺溶液的质量比为100：(5～6)：(5～6)；N-羟基琥珀酰亚胺溶液和碳二亚胺溶液浓度均为50～60mg/mL。

7.如权利要求5所述的黄曲霉毒素B1的荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述复溶液包括磷酸盐缓冲液、蔗糖和吐温混合溶液。

8.一种检测粮油中的黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品前处理；

2)采用权利要求1～3任一项所述的检测卡进行检测；

3)通过用荧光分析仪读取实验结果。

9.如权利要求8所述的检测粮油中的黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，步骤1)中，样品前处理方法具体步骤为：

若样品为油样，称取油样于离心管中，加入提取液并充分混匀，静置后，取下清液备用；

若样品为固体，称取固体于离心管中，加入提取液并充分混匀，离心后，取上清液备用。

10.如权利要求9所述的检测粮油中的黄曲霉毒素B1的方法，所述提取液为浓度为15～50％的甲醇的水溶液。