[发明专利]一种通过定向结合抗体Fc位点有效减小位阻的免疫检测方法在审
| 申请号： | 202111660026.5 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN115015551A | 公开（公告）日： | 2022-09-06 |
| 发明（设计）人： | 林巍靖;郁梦佳;顾冬兰 | 申请（专利权）人： | 上海云泽生物科技有限公司;上海健耕医药科技股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/543 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 吕学辰;黄益澍 |
| 地址： | 201112 上海市闵行区新骏环路*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 定向 结合 抗体 fc 有效 减小 免疫 检测 方法 | ||
1.一种免疫检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1)将带有次氮基三乙酸的N-(5-氨基-1-羧基戊基)亚氨基二乙酸与镍离子混合形成螯合配位体；
(2)将所述螯合配位体与带有His标签的Fc受体混合。
2.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，步骤(1)包括如下步骤：
1-1)将N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶于2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液，加入铺有表面活性剂的微孔反应板内混匀，加入N-(5-氨基-1-羧基戊基)亚氨基二乙酸混匀，去离子水洗涤；加入伯胺封闭，去离子水洗涤；
1-2)加入镍离子盐混匀，去离子水洗涤。
3.如权利要求2所述的免疫检测方法，其特征在于，步骤(2)包括如下步骤：
2-1)将6×His-Fc受体溶液加入微孔反应板，反应1-3h，用PBS缓冲液洗涤；加入抗待测物的抗体，反应1h，用PBS缓冲液洗涤；所述的抗待测物的抗体的质量百分比浓度优选0.005％-0.05％；更优选0.02％；
2-2)加入甘油溶液静置封闭，晾干备用。
4.如权利要求2或3所述的免疫检测方法，其特征在于，所述的微孔反应板为聚苯乙烯材料的微孔反应板。
5.如权利要求2或3所述的免疫检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述的表面活性剂为具有特征结构的聚丙烯酸类表面活性剂；优选Eudragit L100-55、聚丙烯酸、聚苯乙烯-block聚丙烯酸或聚(苯乙烯)嵌段-聚(丙烯酸)；和/或，
所述表面活性剂的质量百分比浓度为1-10％，优选2％。
6.如权利要求2或3所述的免疫检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述的N-(5-氨基-1-羧基戊基)亚氨基二乙酸的质量百分比浓度为0.1-2％，优选0.8％。
7.如权利要求2或3所述的免疫检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述的镍离子盐为2价镍离子盐；优选醋酸镍；更优选0.1M醋酸镍。
8.如权利要求3所述的免疫检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述的6×His-Fc受体为末端带有6个组氨酸的重组Fc受体。
9.如权利要求8所述的6×His-Fc受体，其特征在于，所述的6×His-Fc受体为6×His-FcγR1受体。
10.如权利要求1所述的免疫检测方法，其特征在于，所述免疫检测方法还包括以下步骤：
(3)将待检测样本用PBS稀释后，加入微孔反应板，孵育；
(4)加入标记抗体溶液，孵育；
(5)加入底物或激发液或增强液，孵育、读数。
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